HHV-6初感染ならびに再活性化の病態解明と制御に関する総合的研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670802
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 吉川 哲史 名古屋大学, 医学部, 助教授 (80288472)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須賀 定雄 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70257616) ; 浅野 喜造 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40131180) ; 五島 典 名古屋大学, 医学部, 助手 (70201499)
• Keywords: HHV-6 / 細胞増殖反応 / 非RI / BrdU

Research Abstract

1)抗原作成:突発疹患児より分離したHHV-6 variant B(FG-18株)を臍帯血単核球に接種後、PHA.IL-2存在下で培養し5日目に最大の巨細胞形成(約90%の細胞がHHV-6モノクロナール抗体OHV-3を用いた間接蛍光抗体法で抗原陽性)を示したところで遠心分離。細胞成分をPBSに再溶解し細胞浮遊液(1×10^6/ml)を作成。それを超音波処理後遠心し、上清成分を抗原液として使用。対照として非感染臍帯血単核球を同様に処理し使用。
2)リンパ球増殖反応測定法の至的条件設定:Cell Proliferation ELISAキット(Boehringer Mannheim 社)を使用した。健康成人を対象として上記方法にて作成したHHV-6抗原、Mock感染抗原を用いてリンパ球増殖反応測定のための至的条件を検討。抗原濃度(希釈系列:16倍、32倍、64倍、128倍、256倍、512倍)、被検リンパ球の培養期間(3日、5日、7日)、採血方法(ヘパリン採血、EDTA採血)、検体輸送方法(4゜C保存と常温保存)、BrdUを加えた後の培養期間(2時間、4時間、6時間、O/N)について検討した。その結果、抗原濃度は16倍から64倍まで使用可能であったため以後の実験は抗原液を64倍希釈して使用することにした。リンパ球培養期間は5日、採血方法はヘパリン採血、BrdUを加えた後はO/Nで培養した結果が良好であった。
3)臍帯血、健康成人ならびにHHV-6初感染時リンパ球増殖反応:Stimulation Index(HHV-6抗原刺激/Mock感染抗原刺激)の平均値は以下のとおりであった。健康成人(14例)=5.1、臍帯血(16例)=1.1、突発疹急性期(14例)=1.2、突発疹罹患後1週間(12例)=1.3、突発疹罹患後1ヶ月(8例)=1.8。

Research Products

• [Publications] Yoshikawa T,et al.: "Four cases of human herpesvirus 6 variant B infection after pediatric liver transplantation."Transplantation. 65. 11265-11269 (1998)
• [Publications] Suga S,et al.: "Prospective study of persistence and excretion of human herpesvirus 6 in patients with exanthem subitum and their parents."Pediatrics. 102. 900-904 (1998)
• [Publications] Yoshikawa T,et al.: "Prediction of human herpesvirus 6 intection after allogeneic bone marrow transplantation"Blood. 92. 2597-2599 (1998)
• [Publications] Yoshikawa T,et al.: "Human herpesvirus latently infects mononuclear cells but not liver tissue."J Clin Pathol. 52. 65-67 (1999)
• [Publications] Suga S,et al.: "Clinical characteristics of febrile convulsions during primary HHV6 infection."Arch Dis Child. 82. 62-66 (2000)
• [Publications] Yoshikawa T,et al.: "Human herpesvirus 6 infection after living related liver transplantation."J Med Virol. (in press).