染色体高次構造維持遺伝子(Crm1,Rad51)操作による放射線感受性の制御

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11670897
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 藏 忍 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (90037391)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉村 康秀 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (60263307)
• Keywords: Crm1 / PLD回復 / レプトマイシンB / スナネズミ / 放射線感受性

Research Abstract

スナネズミは放射線抵抗性(LD50=11Gy)であることが知られているがその機構は不明である。それを明らかにするために株化細胞を樹立し(MGFと命名)放射線感受性を調べた。生存率曲線より求めたDoは1.5Gy、Dqは2.5Gyでありとくに放射線抵抗性ではなかったが、PLD回復阻害剤レプトマイシンB(LMB)に対し抵抗性であることがわかった。LMBはCRM1と結合すること、およびCRM1は染色体構造維持や蛋白の核外輸送に関与していることが最近明らかになった。このことからCRM1蛋白がPLD回復に関与していていることが推測される。MGF細胞ではLMBがCRM1と結合できずその機能を阻害できないためにPLD回復がおきる。LMBがCRM1に結合できない原因として両者の結合領域に変異がはいっているのではないかと考えた。この仮説を確かめるためにスナネズミのCrm1をクローニングし解析をおこなった。
[結果]スナネズミのRNA画分を抽出し、他種CRM1に関するアミノ酸配列の比較を基に種間で保存されている領域をえらんで縮重プライマーを設定した。PCRを行いスナネズミのCRM1のCCR領域からC末端までのアミノ酸配列を決定した。LMB感受性である分裂酵母のCRM1においてLMBの結合部位と考えられているCys529に相当する部位をみるとスナネズミの場合も同様にCysであった。
[考察]スナネズミ細胞におけるLMB抵抗性は当初予想していたようにCRM1のLMB結合領域の変異によるものではない事がわかった。しかしCRM1の529のLMB結合部位以外におこった変異により立体構造が変化してLMBと結合出来にくくなり、LMBのCRM1活性阻害が消失している可能性もある。今後、この考えを確かめる為に残っている5'側のシークエンスを行って変異が入っているか否かを明らかにしたいと考えている。

Research Products

• [Publications] T.Tsuzuki et al.: "Analysis of MTH1 gene function in mice with targeted mutagenesis"Mutat.Res.. (in press). (2001)
• [Publications] T.Yoshimura et al.: "Nested genomic structure of haploid germ cell secific haspin gene"Gene (accepted on Feb.9th). (in press). (2001)