2000 Fiscal Year Annual Research Report
コラーゲン受容体GPIa/IIa細胞内ドメインを介した血小板活性化の機序
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11670989
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| Research Institution | Yamanashi Medical University |
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Principal Investigator |
尾崎 由基男 山梨医科大学, 医学部, 教授 (30134539)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 金夫 山梨医科大学, 医学部, 教務職員 (20242662)
矢冨 裕 山梨医科大学, 医学部, 助教授 (60200523)
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| Keywords | 血小板活性化 / コラーゲン受容体 / GPIa / IIa / rhodocytin / チロシンキナーゼ / Src / Cas |
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| Research Abstract |
GPIa/IIaに結合すると思われる蛇毒rhodocytinの特異性を確認するために、GPIa/IIaのレコンビナントを組み込んだリポソームを作成し、rhodocytinとの結合を確認した。また、rhodocytinを用いたアフィニティカラムを作成し、血小板膜糖蛋白との結合を見ることにより、GPIa/IIaとの結合を確認した。このようにrhodocytinがGPIa/IIaと反応することを確認した上で、GPIa/IIaによる血小板信号伝達系路の研究を始めた。これまでに、GPIa細胞内ドメインにチロシンキナーゼであるSrcが結合しており、コラーゲンとGPIa/IIaの結合によりSrcの活性化が起きること、またSrcの活性化のためにはGPIa/IIaがクラスタリングを起こす必要があること、SrcとCasとよばれるアダプター蛋白が結合し、CasがSrcのチロシンキナーゼ活性により燐酸化されることを見いだした。GPIaからCasに至る信号伝達系路は、細胞内cAMPの増加によっても抑制されなかった。一方、これらの現象の下流に位置するSykのチロシンリン酸化、またそのまた下流の細胞内カルシウム動員を起こすphospholipase C-γ2の活性化は、細胞内cAMPの増加により著明に抑制された。GPIa/IIaはこのようにコラーゲン惹起血小板活性化の特徴をよく示しており、コラーゲン受容体の代表的なものの一つであることが確認された。さらにrhodocytinでなく、抗GPIa抗体のF(ab′)2部分を精製し、これをシャーレにコーティングしたものに血小板を張り付け、その活性化を判定することも行った。これによりGPIa/IIaがFAKを含むfocal adhesion complexの形成に至る信号を惹起することを確認した。
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[Publications] Katsue Inoue: "Signal transduction pathways mediated by glycoprotein Ia/IIa in human platelets : comparison with those of glycoprotein VI."Biochemical and Biophysical Research Communications. 256. 114-120 (1999)
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[Publications] Katsue.Inoue-Suzuki: "Rhodocytin induces platelet aggregation.by interacting with glycoprotein Ia/IIa (GPIa/IIa. integrin alpha2betal) :involvement of GPIa/IIa-associated Src and protein tyrosine phosphorylation."Journal of Biological Chemistry. 276. 1643-1652 (2001)
