1999 Fiscal Year Annual Research Report
ストローマ細胞を基とした、レトロウイルスベクター・パッケージング細胞の作成
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11670993
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
伊藤 克彦 京都大学, 医学研究科, 講師 (90281097)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤田 潤 京都大学, 医学研究科, 教授 (50173430)
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| Keywords | ストローマ細胞 / レトロウイルス・ベクター / パッケージング細胞 / 造血幹細胞 |
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| Research Abstract |
本研究では、このFMEVタイプのベクターを、効率良くヒト造血幹細胞(CD34+/CD38-)へ導入することを目的として、以下のことを行う。
(1)ストローマ細胞株を用いた、新たなアンフォトロピック・パッケージング細胞株を樹立する。また、水泡性口内炎ウイルス(VSV)G蛋白やギボン白血病ウイルス(GALV)のenv蛋白とのシュードタイプ・ベクターを産生するパッケージング細胞株を樹立する。これらの細胞を用いて、ヒト造血幹細胞(CD34+/CD38-)への外来遺伝子導入効率を検討する。
(2)上記の方法を用いて、ヒトSP細胞に外来遺伝子導入を試みる。
(3)ヒトSP細胞、CD34+/CD38-細胞を標的細胞として外来遺伝子を導入し、SRC(SCID-mouse repopulating cell)への導入効率を比較し、どちらの細胞が標的細胞として、より適当であるかを検討する。
平成11年度には、以下のことを行った。
1)VSVG蛋白の一過性誘導型発現ベクターのプラスミドを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入した。
2)GALVのenvのcDNAを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入するための発現ベクターを作成した。これを、gag/pol遺伝子を高発現するストローマ細胞のクローンに遺伝子導入し、ストローマ細胞由来のパッケージンク細胞を作成中である。
3)マウスNIH3T3細胞由来のアンフォトロピック・パッケージンク細胞、上記のストローマ細胞由来のパッケージング細胞に、ウイルス・ベクターのプラスミドを導入し、ウイルスベクターの産生細胞を作成中である。
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[Publications] Danno S,Itoh K et al.: "Efficient gene transfer by hybrid retroviral vectors to murine spermatogenic cells"Human Gene Therapy. 10. 1819-1831 (1999)
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[Publications] Tsuji T,Itoh K et al.: "CD34 high+CD38low/-cells generated in a xenogenic coculture system are capable of both long-term hematopoiesis and m**tide differentiation"Leukemia. 13. 1409-1419 (1999)
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[Publications] Tsuji T,Itoh K et al.: "Retroviral vector mediated gene expression in human CD34+CD38-cells expanded in vitro: cis-elements of FMEV are superior to those of MoMLV"Human Gene Therapy. 11. 271-284 (2000)
