本能性血小板症におけるTGF-βシグナル異常の解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671007
• Research Institution: Sapporo Medical University
• Principal Investigator: 坂牧 純夫 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (00196081)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 新津 洋司郎 札幌医科大学, 医学部, 教授 (10045502)
• Keywords: 巨核球造血 / 本能性血小板症 / TGF-β / トロンボポイエチン / Smad / CFU-Meg

Research Abstract

[目的]ETにおける巨核球過増殖の原因解明のため、本症の巨核球造血が生理的なTGF-β1の抑制から逸脱しているか否か、また逸脱していればその機序をあきらかにする。
[対象と方法](1)正常人およびET患者骨髄単核球を採取。トロンボポイエチン(TPO)(100ng/mL),G-CSF(100ng/mL),エリスロポイエチン(EPO)(2U/mL)存在下にそれぞれ培養し巨核球(CFU-Meg)、顆粒球(CFU-GM)、赤芽球コロニー(BFU-E)形成数を算定する。またTGF-β(0-1.0ng/mL)を添加培養しそのコロニー形成抑制効果を検討する(2)培養day14にコロニーを回収しtotal RNAを抽出。TaqMan real time RT-PCR法でSmad2,3,4,5mRNAの発現を定量的に解析する。(3)Smad4遺伝子発現レトロウイルスベクターでフィブロネクチンを用いてET患者骨髄単核球に遺伝子導入しCFU-Megコロニー形成に対するTGF-βの抑制効果を検討する。
[結果]正常人の巨核球コロニーはTGF-β1.0ng/mL添加により完全に抑制されたがET患者の抑制率は45〜65%程度であった。CFU-GM,BFU-Eコロニー形成抑制率は正常者、ET患者ともにそれぞれ平均30%,40%であった。正常者のSmad4mRNA発現はCFU-Megで最も高く認められた。またET患者CFU-MegでのSmad4発現は正常者のそれに比較し有意に低下していた。また、ET患者骨髄単核球にSmad4遺伝子を導入するとCFU-Megコロニー形成はTGF-βにより抑制された。
[考察・結論]ET患者CFU-MegではSmad4発現低下のためTGF-βの増殖抑制から逸脱していると考えられた。またCFU-GM,BFU-Eにおいても発現低下があり幹細胞レベルでの異常と考えられた。

Research Products

• [Publications] Matsunaga T, Sakamaki S, et al.: "Use of PCR serum in diagnosing and monitoring cytomegalovirus reactivation in bone marrow transplant recipients."Int J Hematol.. 69. 105-111 (1999)
• [Publications] Teramoto J, Sakamaki S, et al.: "Systemic lupus erythematosus with a giant rectal ulcer and perforation"Internal Medicine.. 38. 643-649 (1999)
• [Publications] Kogawa K, Sakamaki S, et al.: "Enhanced inhibition of experimental metastasis by the combination chemotherapy of Cu-Zn SOD and adriamycin.Clin Exp Metastasis."Clin Exp Metastasis.. 17. 239-244 (1999)
• [Publications] Sakamaki S, Hirayama Y, et al.: "Transforming growth factor-β1(TGF-β1)induces thrombopoietin from bone marrow stromal cells, which stimulates the expression of TGF-β receptor on megakaryocytes and, in tum, renders them susceptible to suppression by TGF-β itself with high specificity."Blood.. 94. 1961-1970 (1999)
• [Publications] Nobuoka A, Sakamaki S, et al.: "A case of malignant lymphoma producing autoantibody against platelet glycoprotein Ib."Int J Hematology.. 70. 200-206 (1999)
• [Publications] Sakamaki S, Takayanagi N, et al.: "Auto-antibodies against the specific epitope of human tropomyosin(s) detected by a peptide-based enzyme immunoassay in sera of patients with ulcerative colitis show antibody dependent cell-mediated cytotoxicity against HLA-DAw9 transfected L-cells."Gut. (in press).