免疫抑制剤ミゾリビンに結合する腎蛋白質(特に分子シャペロン)に関する研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671024
• Research Institution: Akita University
• Principal Investigator: 涌井 秀樹 秋田大学, 医学部, 講師 (70240463)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 小松田 敦 秋田大学, 医学部, 助手 (70272044) ; 伊藤 英晃 秋田大学, 医学部, 助教授 (80168369)
• Keywords: 免疫抑制剤 / ミゾリビン / 分子シャペロン / HSP60 / 14-3-3蛋白 / HIT蛋白

Research Abstract

1.ミゾリビンとHSP60について
(1)ミゾリビンがHSP60に強く結合することをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーと表面プラズモン共鳴分析法により示した。
(2)種々のミゾリビンアフィニィティーカラムを用いた分析により、ミゾリビン分子内のNH_2グループの構造がHSP60との結合に関与することを示した。
(3)ミゾリビンがHSP60のシャペロン活性を抑制することを変性酵素の再修復能を測定する系を用いて示した。
以上、ミゾリビンの標的蛋白としてHSP60を初めて同定した。ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つにHSP60のシャペロン活性の抑制があるものと考え、米国生化学分子生物学会誌に発表した。
2.ミゾリビンと14-3-3蛋白について
(1)ミゾリビンが14-3-3蛋白と結合して構造を変化させることをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーとCDスペクトラムにより示した。
(2)14-3-3蛋白は活性型グルココルチコイドレセプター(GR)に作用し、その転写能を増強させる(Wakui H, et al., J Biol Chem 272:8153-6,1977)。そこで、ミゾリビンがこの系に及ぼす影響についてGTS pull-down法とトランスフェクション法により検討した。その結果、ミゾリビンは14-3-3蛋白のGRへの結合能を高め、GRの転写活性能を増強させた。
以上、ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つとして、分子シャペロン14-3-3蛋白を介するGR転写活性増強作用があるものと考え、生化学生理学研究速報誌に発表した。
3.17kDミゾリビン結合蛋白について
更に17kDミゾリビン結合蛋白をHIT蛋白と同定した。この蛋白はある種の転写因子と相互作用することが最近報告されたので、この系にミゾリビンの及ぼす影響を検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Hideaki Itoh: "Mammalian HSP60 is a major target for an immunosuppressant Mizoribine"The Journal of Biological Chemistry. 274・49. 35147-35151 (1999)
• [Publications] Shu Takahashi: "Functional interaction of the immunosuppressant Mizoribine with the 14-3-3 protein"Biochemical and Biophysical Research Communications. 247・1. 87-92 (2000)