組換えアデノウイルス系を用いたインスリン感受性PDEキナーゼ活性化機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671122
• Research Institution: Ehime University School of Medicine
• Principal Investigator: 牧野 英一 愛媛大学, 医学部, 教授 (50009578)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大沼 裕 愛媛大学, 医学部, 助手 (00294794) ; 大澤 春彦 愛媛大学, 医学部, 助教授 (90294800)
• Keywords: インスリン / PDE3B / アデノウイルス / Akt / PI3-K

Research Abstract

インスリンはinsulin-sensitive phosphodiesterase(PDE3B)を活性化しcAMPを低下させることにより抗脂肪分解作用を発揮する。申請者らはcell free系でのPDEキナーゼアッセイ系を確立しインスリンにより活性化されるPDEキナーゼはPI3-キナーゼの下流にある未知のキナーゼであることを明らかにした。そこで本研究ではPI3-キナーゼ及びその直下にあると考えられるAktをアデノウイルス系を用いて脂肪細胞に遺伝子導入し、PDEキナーゼ活性化機構におけるこれらの役割を明らかにすることを目的とした。昨年度は神戸大学医学部第2内科小川博士らにより提供された組換えアデノウイルス(dominant negative Akt,dominant negative PI3-K)及びβ-GALを発現するコントロールウイルスをそれぞれ293細胞に感染させ高力価ウイルス液を調整した。そこで本年度はこれらのウイルスを3T3L1脂肪細胞に感染させ、β-GALの発現及びAktまたはまたはPI3-K蛋白の発現をウェスタンブロットにより確認し最適のウイルス力価を算定した。現在これらの組み換えウイルスを3T3L1脂肪細胞に感染させ、インスリンとともにインキュベートし、PDE活性、PDEの燐酸化、PDEキナーゼ等を解析しAktまたはPI3-KがPDEキナーゼ活性化系に関与するかどうか解析を進めているところである。

Research Products

• [Publications] Tang Y.: "Improvement in insulin resistance and the restoration of reduced PDE3B gene expression by pioglitazone in adipose tissue of obese, diabetic KKAy mouse."Diabetes. 48. 1830-1835 (1999)
• [Publications] Yamada,K: "Human ZHX1 : cloning, chromosomal location, and interaction with transcription factor NF-Y."Biochem Biophys Res Commun. 261. 614-621 (1999)
• [Publications] Niiya,T.: "A complete defficiency of coagulation factor XIII A-subunit due to a novel compound heterozygote of Ser 413 Leu missense and an nt 389 (ins G) frame shift mutations."Br J Haematol. 107. 772-775 (1999)
• [Publications] Yamada,K: "Identification of proteins that interact with NF-YA."FEBS Lett. 460. 41-45 (1999)
• [Publications] Ishizuka N.: "Tumor necrosis factor alpha signaling pathway and apoptosis in pancreatic beta cells."Metabolism. 48. 1485-1492 (1999)
• [Publications] Kuramoto N: "Effect of ACE gene on diabetic nephropathy in NIDDM patients with insulin resistance."Am J Kidney Dis. 33. 276-281 (1999)
• [Publications] Sakurai K.: "Mutations in the bepatocyte nuclear factor-4alpha gene in Japanese with non-insulin-dependent diabetes : a nucleotide substitution in the polypyrimidine tract of intron 1β."Horm Metab Res. 32. 316-320 (2000)
• [Publications] Wang,J-C.: "Transducin-like enncer of split proteins, the human homologs of drosophila groucho, interact with hepatic nuclear factor 3β"J Biol Chem. 275. 18418-18423 (2000)
• [Publications] Osawa,H.: "Identification of novel C253Y missense and Y864X nonsense mutations in the insulin receptor gene in type A insulin resistant patients."Clin Genet. (in press). (2001)
• [Publications] 大澤春彦,大沼裕,牧野英一: "HbA1cの活用.軽症糖尿病 早期発見・早期管理."河盛隆造,門脇孝 編、中外医学社、東京、. 92-98 (1999)
• [Publications] 大澤春彦,牧野英一: "臨床診断の進め方 プラクティカル内科シリーズNo.6糖尿病"岩本安彦 編、南江堂、東京. 21-27 (1999)
• [Publications] 大澤春彦,大沼裕,長谷川雅昭,牧野英一: "HbA1,HbA1c 検査値のみかた 改訂2版"中井利昭 編、中外医学社 東京、. 439-442 (2000)
• [Publications] 大澤春彦,牧野英一: "日本糖尿病療養指導士受験ガイドブック2000.日本糖尿病療養指導士認定機構編"メヂカルビュー社、東京. (2000)