1999 Fiscal Year Annual Research Report
消化器癌に対する新しい腫瘍特異的遺伝子治療の開発とヒト癌同所移植による解析
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11671180
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (70244738)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
角田 卓也 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (30275359)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (20191190)
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| Keywords | 遺伝子治療 / Cre / loxP system / CEA promoter / tissue specific expression / adenovirus vector / 胃癌同所移植モデル |
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| Research Abstract |
1.CEA promoterのcloningとAdenovirus vectorの作製
CEA promoterはMKN45のgenome DNAをtemplateとし,CEAの5側上流領域(-299〜+69)をPCRにて増幅し,このPCR productをPCR2.1にcloningした.adenovirus vectorはCOS-TPC法を用いてCEA promoter制御下にCre recombinaseを発現するAxCEANCre,CEA promoter制御下にLacZ遺伝子を発現するAxCEALacZ,CAG promoter制御下にLacZ遺伝子を発現するAxCALacZ,およびCre存在下でCAG promoter下にLacZ遺伝子を発現するAxCALNLZを作製した.
2.Cre/loxP systemによるCEA産生腫瘍特異的LacZ発現の検討
1)CEA産生株MKN45ではAxCEANCreとAxCALNLZ(total moi 50)の感染比率を3:2にした場合にLacZの発現が最も高かったので,至適感染比率を3:2と決定した.
2)X-gal染色にてCEA産生株では,AxCEANCreとAxCALNLZの2重感染(total moi 50)で約70%の細胞が陽性となったが,AxCEALacZ感染(moi 50)では約10%の細胞が陽性にすぎなかった.また,CEA非産生株では染色陽性細胞を認めなかった.β-gal assayでも,この2重感染はCEA産生株でAxCEALacZ感染の7倍量のLacZ発現を認めた.
3)7週齢BALB/cヌードマウスの胃体部大弯側胃壁にMKN45の腫瘍塊(2mm角)を移植した胃癌同所移植モデルを作成した.4週間腫瘍を発育させた後に,AxCEANCre+AxCALNLZ,AxCALacZ,AxCEALacZのいずれかのadenovirus vector(2.5 pfu)を腹腔内に投与した.4日後に開腹して,胃壁の腫瘍,正常胃および肝臓を摘出し,X-gal染色にてLacZ発現を比較した.2重感染によるadenovirus vector投与は胃の腫瘍部位でのみAxCALacZ投与と同程度のLacZ発現を示し,AxCEALacZ投与ではほとんど発現を認めなかった.正常組織ではAxCALacZ投与のみで腫瘍部位と同様の発現を認めた.
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[Publications] Makoto Iwahashi: "CDR substitution of humanized monoclonal antibody(CC49): Contributions of individual CDRs to antigen binding and immunogenicity"Molecular Immunology. 36. 1079-1091 (1999)
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[Publications] Takuya Tsunoda: "In vitro augmentation of antitumor effect in combination with CPT-11 and CDDP for human colorectal cancer"J Surg Oncology. 73(1). 6-11 (2000)
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[Publications] Makoto Iwahashi: "Clinical evalution of hepatic arterial infusion of low dose-CDDP and 5-FU with hyperthermotherapy: a preliminary study for liver metastases from esophageal and gastric cancer"Hepatogastroenterology. 46(28). 2504-2510 (1999)
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[Publications] Hiroki Yamaue: "Multidisciplinary treatment for gastric cancer patients by chemoimmmunotherapy"Hepatogastroenterology.. 46(25). 620-625 (1999)
