2000 Fiscal Year Annual Research Report
消化器癌に対する新しい腫瘍特異的遺伝子治療の開発とヒト癌同所移植による解析
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11671180
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| Research Institution | Wakayama Medical University |
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Principal Investigator |
岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (70244738)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教授 (20191190)
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| Keywords | Cre / loxP system / CEA promoter / adenovirus vector / 胃癌同所移植モデル / CD / 5-FC自殺遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
1.Cytosine deaminase(CD)発現adenovirus vectorの作製とin vitroにおける5FCの腫瘍増殖抑制効果の検討
(1)CEA promoterをCD geneとともにcosmid vector(pAdex1cW)に組み込んだpAxCEACDを作製した.さらにCre発現unit(pAxAwNCre)にCEA promoterを組み込んだpAxCEANCreを作製した.またCD geneをpAxCALNLwのSwaI siteにcloningした.COS-TPC法を用いて,それぞれの発現ウイルスAxCEACD,AxCEANCre,AxCALNLCDを作製した.
(2)In vitroにて胃癌や大腸癌のCEA産生株(MKN-45,LoVo)とCEA非産生株(HeLa,MKN-1)にCre/loxP systemを用いたAxCEANCreとAxCALNLCDをそれぞれ30,20moiで2重感染させ、5-FCの腫瘍増殖抑制効果(IC50)をMTT assayで検討し,AxCEACD感染(50moi)と比較した結果,AxCEANCreとAxCALNLCDの2重感染では,CEA産生株において,AxCEACD単独感染と比較し,有意に低く,5-FCの感受性は13倍に増強された.CEA非産生株については,細胞障害活性はほとんど認めず,CEApromoterの特異性は完全に維持された.
2.胃癌同所移植モデルにおけるin vivo治療実験
胃癌腫瘍塊(MKN45)をヌードマウスの胃壁に縫着し,胃癌同所移植モデルを作成した.i)Mock,ii)AxCEACD,iii)AxCEANCre+AxCALNLCD(3:2)を,4日目より3日間1.0x10^9pfu,i.p.投与し,その翌日とり5-FCを500mg/kg/day,10日間i.p.投与した.胃癌移植4週後に屠殺して移植した腫瘍体積,重量を測定した結果,iii)群では腫瘍増殖が著しく抑制され,他群と有意差を認めた.さらに,生存期間はiii)群が,他群より著明に延長した(p<0.01).
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[Publications] Makoto Iwahashi: "CDR substitution of a humanized monoclonal antibody (cc49) : Contributions of individual CDRs to antigen binding and immunogenicity"Molecular Immunology. 36. 1079-1091 (1999)
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[Publications] Makoto Iwahashi: "Clinical evalution of hepatic arterical infusion of low dose-CDDP and 5-FU with hyperthenmotherapy : a preliminary study for liver metastases from esophageal and gastric cancer"Hepatogastroenterology. 46(28). 2504-2510 (1999)
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[Publications] Hiroki Yamaue: "Multidisciplinary treatment for gastric cancer patients by chemoimmunotherapy"Hepatogastroenterology. 46(25). 620-625 (1999)
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[Publications] Kentaro Ueda: "Enhanced selective gene expression by adenovirus vector using Cre/loxP regulation system for human carcinoembryonicantigen-producing Carcinoma"Oncology. 59(3). 255-265 (2000)
