遺伝子銃によるサイトカイン遺伝子の培養軟骨細胞への導入と軟骨細胞移植における発現

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671438
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: 梅原 隆司 徳島大学, 医学部, 助手 (20263816)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中野 俊次 徳島大学, 医学部・附属病院, 助手 (60294683) ; 姫野 國祐 徳島大学, 医学部, 教授 (50112339) ; 武田 芳嗣 徳島大学, 医学部・附属病院, 講師 (20243694)
• Keywords: 軟骨細胞 / 遺伝子 / サイトカイン

Research Abstract

In vitroでの遺伝子銃による遺伝子の導入の可否をみるために、軟骨片および軟骨細胞に分離した状態で培養を行った。切断肢、大腿骨頚部内側骨折および、変形性股関節症、変形性膝関節症患者の手術時に、可及的に軟骨片を採取した。軟骨片の培養は、軟骨片をGey's balanced salt solusionにて洗浄後、DME/F12混合培地+10%FBSにて培養した。培養開始後、1、3,5,7日、2,3,4週目に、後に述べる方法にて軟骨細胞を分離し、dye exclusion法にて、軟骨細胞のviabilityを調べた。軟骨細胞培養は、0.15%トリプシンおよび0.15%コラゲナーゼにて軟骨細胞に分離しDME/F12混合培地+10%FBSにて培養した。培養開始後、1、3,5,7日、2,3,4週目に、同様にdye exclusion法にて、軟骨細胞のviabilityを調べた。
いずれの方法にても4週間の培養が可能となったため、次にマーカー遺伝子を軟骨細胞に導入可能か否かの検討を始めた。導入に用いる金粒子を洗浄の後、pSV-β-Galactosidase Control Vectorを付着させた。この粒子を、前述の手術材料から採取した軟骨片にHelios gene gunを用いて大気圧下で射入した。これらの軟骨片を、射入直後および培養1,3,5,7日目に、0.1%X-gal染色を用いて軟骨細胞内に導入されているか否か、現在検討中である。