腎臓における糖輸送体アイソフォームの分布と調節機構解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671535
• Research Institution: Gunma University
• Principal Investigator: 藤倉 恵子 群馬大学, 生体調節研究所, 教務員 (10218993)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鈴木 健史 群馬大学, 医学部, 助手 (00261868) ; 高田 邦昭 群馬大学, 医学部, 教授 (20129290)
• Keywords: 腎臓 / GLUT4 / GFP / 糖輸送体 / タイムラプス / ラット

Research Abstract

ラット腎臓において、GLUT4は尿細管のヘンレのループの太い部分の細胞内のコンパートメントに局在する。GLUT4の細胞内の動態を明らかにするために、培養細胞系で緑の蛍光を発するグリーンフルオレッセントプロテイン(GFP)とGLUT4との融合蛋白質のコンストラクトを作製し、Cos細胞で発現させて局在を観察した。GFPとのリンカーの長さを様々にかえたものをスクリーニングしたところ、GLUT4との免疫染色で、GFPシグナルとGLUT4の抗原部位とが一致するものが得られた。これを3T3-L1細胞に導入し、内在性のGLUT4とも比較し、GFP-GLUT4が内在性のものと同一の挙動をとるのを確認した。次にGFP-GLUT4を発現させた3T3-L1細胞を、倒立顕微鏡下にタイムラプス観察した。現在観察用チャンバーや、観察条件の設定しているところである。現在までのところ、細胞内でのGFP-GLUT4の動きを高分解能で観察したところ、核周囲部の比較的動きの遅いコンパートメントと、そこから細胞の辺縁への直線的な早い動きのあるコンパートメントとを確認している。また蛍光標識トランスフェリンを取り込ませたものとの二重標識タイムラプス観察も試みている。

Research Products

• [Publications] Suzuki T.: "The apical localization of SGlt1 glucose transporter is determined by the short amino acid sequence in its N-terminal domain"Eur J Cell Biol. 80. 765-774 (2001)
• [Publications] Takata K.: "Glucose transporters - Localization to specific membrane domains"電子顕微鏡. 36. 23-25 (2001)