2000 Fiscal Year Annual Research Report
分泌型hybrid IL-18遺伝子導入による免疫遺伝子治療の基礎的検討
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11671553
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
原 勲 神戸大学, 医学部, 助手 (10263378)
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| Keywords | IL-18 / 遺伝子治療 / 腎細胞癌 |
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| Research Abstract |
mouse genomic DNAよりInterferon α signal sequenceに相当する部分をPCRにてつり上げた後、overlap extension法を用いて天然型IL-18 cDNAの上流に融合させhybrid cDNA(分泌型IL-18cDNA)を作成しました。天然型、分泌型IL-18 cDNAをそれぞれ哺乳動物細胞のexpression vectorに組み込みました。
マウス腎癌細胞株(RenCa)に天然型および分泌型双方のIL-18 cDNAをtransfectionし、多数のstable transformantを得ました。それぞれのクローンにつきnorthern blotting法を用いてIL-18 cDNAの発現を調べ、IL-18のmessageを有するものをpositive cloneとして選出しました。Positive cloneに関しては培養上清中のIL-18の活性をELISA法にて測定しました。この結果分泌型IL-18を導入したtransformantにおいてのみ培養上清中でのIL-18の活性が認められました。
天然型、分泌型IL-18 cDNAを遺伝子導入したtransformantと母細胞である腎癌細胞株を同系マウス(Balb/c)に皮下接種しました。天然型IL-18のtransformantは母細胞と同程度の腫瘍増殖を示したのに対し、分泌型IL-18 cDNAを遺伝子導入したtransformantは同系マウスに完全拒絶されました。しかしながらヌードマウスに皮下接種した際には分泌型IL-18 cDNAを遺伝子導入したtransformantは遅いながらも腫瘍増殖を示し、抗腫瘍効果にはT cellが関与していることが示唆されました。今後はNK細胞の関与や、腫瘍ワクチンとしての可能性につき検討していくつもりです。
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