ヒト前立腺におけるステロイドホルモン代謝型P450に関する研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671575
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 川嶋 秀紀 大阪市立大学, 医学部, 助手 (70234060)
• Keywords: P450・3A5 / human prostate / uniqne 5'-untronslated sequence / protein expression / purification / 6β-hydroxylation / testosterone / progesterone

Research Abstract

ヒト前立腺のcDNAライブラリーよりCYP3A5のcDNAを単離した。このヒト前立腺のCYP3A5のcDNAには、特異的な5'非翻訳領域が含まれており、CYP3A5は前立腺では肝と異なった転写調節を受けている事が示唆された。更にヒトゲノムのBACライブラリーをCYP3A5のcDNAをプローブにスクリーニングしたところ5個の陽性クローンが得られ、そのうち2個のクローンには、前立腺特異的な5'非翻訳領域が含まれている事がSouthern解析により示された。
このCYP3A5の組みかえ体蛋白発現を行なった。発現ベクターPCWOriを用い大腸菌に発現させた蛋白をポリヒスチジンTagとニッケルカラムを用い精製し,比含量4.4nmol/mgの蛋白標品を得た。このP450の酵素活性を調べたところ,テストステロンやプロゲステロンの6β水酵化活性を有していた。一方ジヒドロテストステロンに対する活性は認められなかった。更にテストステロン,プロゲステロンの6β水酸化活性に対するカイネティックスタディーを行なった。

Research Products

• [Publications] Yesuo Yamakoshi, Taketoshi Kishimoto, Kazunobu Sugimura, & Hidenori Kawashima,: "Human Prostate CYP3A5: Identification of a Unique 5'-Untranslated sequence and Characterization of Purified Reconbinant Protein"Biochemical and Biophysical Research Communications. 260. 676-681 (1999)