CA125遺伝子プロモーターの同定と卵巣癌特異的遺伝子治療の試み

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671624
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 濱田 雄行 愛媛大学, 医学部・附属病院, 講師 (90172973)
• Keywords: 卵巣癌 / 遺伝子治療 / CA125 / 臓器特異性 / プロモーター / 転写因子 / 腺癌 / エンハンサー

Research Abstract

EMBL SP6/T7 phage libraryよりCA125遺伝子のgenomic DNAの上流500bpをprobeにしてクローニングしたgenomic DNAを、exon 1よりさらに上流5kbまでシーエンスを行った。CA125遺伝子のexon 1は、exon 1Aおよびexon 1Bよりなっており、正常リンパ球ではexon 1Aから、卵巣癌細胞株ではexon 1Bからの遺伝子発現が認められるとされていることから、転写開始点をSMART PCR cDNA Synthesis kitにより確認したところ、従来exon 1Bに転写開始点のあることが明らかとなった。このため、exon 1Bの転写開始点を含めてanti-sense primerを設定し、PCRにより250bpから500bp毎にsense primerを設定することによりdeletion mutantを作成し、dual luciferase assay kit(Promega)を用いることにより、luciferase assayを行いCA125遺伝子の転写活性部位の特定を行った。500bpのところにプロモーター活性を認め、1875bpの所にエンハンサー活性のあることが明らかとなった。

Research Products

• [Publications] Harada,H.,Nakagawa,K.,Iwata,S.,Saito,M.,Kumon,Y.,Sasaki,S.,Sato,K.,Hamada,K.,: "Restoration of wild-type p16 down-regulates vascular endothelial growth factor expression and inhibits angiogenesis in human glimas."Cancer Research. 59. 3783-3789 (1999)
• [Publications] Sarkar,A.K.,Mitchell,M.F.,Hamada,K.,Buchl,S.J.,Satterfield,W.C.,Schapiro,S.J.,Keeling,M.E.,Sastry,K.: "Evaluation of cellular immune responses in rhesus monkeys subjected to adenovirus-mediated gene transfer into the cervix."Cancer Gene Therapy. 6. 220-227 (999)
• [Publications] Hamada,K.,Kihana,T.,Kataoka,M.,Yoshioka,S.,Nishio,S.,Matsuura,S.,and Ito,M.: "Urinary disturbance after therapy for cervical cancer:urodynamic evaluation and β2-agonist medication."International Urogynecology Journal. 10. 365-370 (1999)
• [Publications] 濱田雄行: "疾患・臨床研究の実際、固形癌、卵巣癌、遺伝子治療研究開発ハンドブック"日本遺伝子治療学会編. 6 (1999)