培養表皮角化細胞とメラノサイトへの遺伝子導入効率に関する基礎的研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11671780
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 山本 有平 北海道大学, 医学部・附属病院, 助手 (70271674)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 杉原 平樹 北海道大学, 医学部, 教授 (20002157)
• Keywords: 遺伝子導入 / マーカー遺伝子 / 導入効率 / ヒト表皮角化細胞 / ヒトメラノサイト系細胞

Research Abstract

正常ヒト表皮角化細胞、正常ヒトメラノサイトの株化が困難であったため、まず角化細胞としてヒト食道癌細胞株であるHEC46、ヒトメラノサイト系細胞としてヒト黒色腫細胞株であるMeWo,AKl、そして遺伝子導入のコントロールとしてアフリカミドリザル腎細胞株であるCOS7の4細胞株を遺伝子導入の対象とした。
導入遺伝子として我々は、
1)Hemoagurutinin(HA)をマーカーとした、HA-tagのプラスミド(pCMVHA)
2)ヒト・ゲルソリン(アクチン調節蛋白質、質量90KDa)のcDNAをpCMVHAに組み込んだコンストラクト(pCMVHA-hGSN)
の2種類を用意した。導入されたか否かは、pCMVHA-hGSNを導入された細胞から蛋白を抽出し、cDNAを導入されたために細胞が産生する90Kdaのヒト・ゲルソリンがWestern法で抗HA抗体にて検出されるかどうかで判定した。
まず作成されたマーカー遺伝子(pCMVHA-hGSN)が導入遺伝子として機能するかどうかを検証するため、COS7に導入を行い、Western法でゲルソリンのバンドを抗HA抗体にて確認した。