ヒト歯周組織由来細胞の機械的外力による細胞接着・伸展因子の動態の解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11672091
• Research Institution: Kanagawa Dental College
• Principal Investigator: 川瀬 俊夫 神奈川歯科大学, 歯学部, 教授 (30084784)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 根岸 秀幸 神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (60121026) ; 倉田 茂昭 神奈川歯科大学, 歯学部, 講師 (20104333) ; 藤原 努 神奈川歯科大学, 歯学部, 助教授 (50084778)
• Keywords: (1)歯周組織細胞 / (2)歯根膜由来線維芽細胞 / (3)歯槽骨由来細胞 / (4)ストレッチング / (5)細胞接着・伸展因子

Research Abstract

ヒト歯周組織から、歯根膜と歯槽骨からExplant法にて初代培養細胞(HPLF、HABC)を得た。特に歯根膜はサンドイッチ法(Kawase et al,Adv Dent Res,1988)により行った。継代したHPLFとHABCはALPaseをもち、しかもVitamin D3とDexでALPase活性が上昇する事、さらにβ-グリセロリン酸添加で石灰化能を示した。
2x10^4cells/cm^2の細胞密度でHPLFとHABCをtype I collagenをコーティングしたflexible bottomed wellに播種し、confluentになるまで培養する。その後、無血清培地の条件でFlexcer Strain Unitを用いて負荷を最大伸張度7-25%、3 cycles/minの頻度で24、48、72時間の培養を行う。ストレッチングの負荷時に1 MBq/ml^<35>S-Metを添加し、ストレッチング依存のタンパク質の合成を検索する。すなわち、^<35>S-Met標識タンパク質をイオン交換クロマトグラフィー、SDS-PAGEでさらに分離し、ゲルを乾燥後、フルオログラフィーを得た。
その結果、イオン交換クロマトグラフィーのパターンからストレッチングによってタンパク質の負に対する荷電度が減少していた。このことは脱リン酸化を示唆するものと考えられた。また、オステオネクチン相当の分子量を示すバンドに^<35>S-Metが標識され、しかも取り込みが上昇していた。一方、ストレッチングを負荷したクロマトグラフィーにおいて0.5M NaCLでも溶出されない分画があり、1M酢酸で溶出し、フルオログラフィーで調べると、オステオネクチンと同じ分子量を示す分子量を示すバンドが認められた。今後、オステオネクチンであるか否かの同定をする予定である。

Research Products

• [Publications] Yasumasa Kato: "Stimulation of motility of human renal cell carcinoma by SPARC/Osteonectin/BM-40 associated with type IV collagen"Invasion Metastasis. 18. 105-114 (1999)
• [Publications] Shigenari Kimoto: "Cytokine secretion of periodontal ligament fibroblasts derived from human deciduous teeth:effect of mechanical stress on the secretion .."J Periodont Res. 34. 235-243 (1999)
• [Publications] Wagner Rodrigues Duarte: "Effect of mechanical stress on the mRNA expression of S100A4 and cytoskeletal components by periodontal ligament cells"J of Medical and Dental Sciences. 46・3. 117-122 (1999)
• [Publications] Nobuyuki Karasawa: "Transient coexistence of tyrosine hydroxylase and γ-aminobutyric acid immunoreactivities in the developing anterior olfactory nucleus of the mouse"Acta Hisutochem Cytochem. 32・4. 333-339 (1999)
• [Publications] Nobuyuki Karasawa: "Age-associated changes in the dopamine synthesis as determined by GTP cyclohydrolase I inhibitor in the brain of senescence-accelerated......."Neuroscience Res. 35. 31-36 (1999)
• [Publications] Minoru Onozuka: "Impairment of spatial memory and changes in astroglial responsiveness following loss of molar teeth in aged SAMP8 mice"Behavioural Brain Res. 108. 145-155 (2000)