2000 Fiscal Year Annual Research Report
ダイオキシン類による毒性発現の制御分子と動物種差に関する研究
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11672225
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
高橋 芳樹 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (80292019)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
有吉 範高 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (00243957)
藤田 健一 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (60281820)
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| Keywords | 芳香族炭化水素受容体 / 異物応答配列 / DNAのメチル化 |
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| Research Abstract |
研究目的:ダイオキシン(TCDD)や3-メチルコランスレンなどの芳香族炭化水素(AH)は、環境中に存在する毒物質の代表であり、ホルモン撹乱物質としても注目されている化学物質である。AHは、生体内に入ると、先ず芳香族炭化水素受容体(AhR)と結合し、さらに標的配列である異物応答配列(XRE)に結合することで、遺伝子の発現を制御していると考えられている。我々は、これまで、AhRとXREの結合に対し、抑制的に働く因子、USF1を見いだした。そこで、本研究では、AhRの作用に抑制的に働く因子や、AhRによる遺伝子の活性化を抑制する分子機構を探索した。
研究実績:AhRとXREの相互作用を抑制する核内転写因子の探索:我々は、DT-ジアホラーゼ遺伝子は、AHによりラットでは活性化されるがモルモットでは活性化されないことを見いだした。興味深いことにモルモットDT-ジアホラーゼ遺伝子の上流領域にもXRE配列が存在していた。この配列は、AhRとも結合するが、Sp1とも結合できることが明らかとなった。モルモットXRE配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流に連結したレポータープラスミドとAhRおよびArntの発現プラスミドをSL2細胞に導入すると、MCによりルシフェラーゼ活性が誘導された。しかし、Sp1の発現プラスミドを加えるとルシフェラーゼ活性が低下することが明らかとなった。我々は、MCによるCYP1A1遺伝子の発現が、遺伝子のメチル化によって制御されていることを見いだした。CYP1A1遺伝子の上流領域は、高度にメチル化され、メチル化結合因子であるMeCP2が結合していることが明らかとなった。Gal4-MeCP2の発現プラスミドとGal4の結合部位を含むCYP1A1遺伝子のレポーターをHepG2細胞に導入すると、MCによるルシフェラーゼ活性の誘導が抑制された。
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