2000 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子医薬品の体内動態および細胞取り込み機構の解明に基づくデリバリー戦略の確立
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11672257
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| Research Institution | KYOTO UNIVERSITY |
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Principal Investigator |
高倉 喜信 京都大学, 薬学研究科, 教授 (30171432)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山下 富義 京都大学, 薬学研究科, 助教授 (30243041)
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| Keywords | 遺伝子治療 / DNAワクチン / プラスミドDNA / マクロファージ / 細胞取り込み / CpGモチーフ / 腫瘍壊死因子 / インターロイキン-6 |
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| Research Abstract |
近年、遺伝子治療やDNAワクチンのアプローチにおいて、遺伝子を通常の医薬品と同様、直接患者に投与するin vivo法の確立が望まれており、なかでも非ウイルスベクターであるプラスミドDNAを用いる方法は有用かつ安全な手段として期待されている。しかしながら、生体に投与されたプラスミドDNAの体内動態に関する情報は極めて乏しく、標的細胞やそれ以外の細胞における取り込み機構に関してもほとんど知られていないのが現状である。一方、最近プラスミドDNAが、マクロファージ等の免疫担当細胞を活性化し、炎症性サイトカインが誘導されることが報告され、安全性の観点からもプラスミドDNAの体内動態や細胞取り込み機構を解明することが重要と考えられている。昨年度は、マクロファージにおける取り込み機構に焦点を当てスカベンジャー受容体の特性に極めて類似した機構の関与などを明らかにした。そこで本年度は、取り込み後に起こる活性化について検討した。プラスミドDNAなど細菌DNAにはメチル化を受けていないCpGモチーフと呼ばれる配列が存在し、これを認識することで、炎症性サイトカインを誘導することが知られている。我々はプラスミドDNAとリポソームとの複合体によって起こる免疫活性化をマクロファージのin vitro培養系で検討した。プラスミドDNAとカチオン性リポソーム複合体をマクロファージに取り込ませた結果、腫瘍壊死因子やインターロイキン-6などの炎症性サイトカインの顕著な産生が認められた。しかしながら、同様の現象はメチル化したプラスミドDNAおよびCpGモチーフを持たない哺乳類由来の牛胸腺DNAの場合にも認められ、DNA・リポソーム複合体がマクロファージに取り込まれた場合にはCpGモチーフ非依存的な活性化が起こることが明らかとなった。
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