糖尿病患者骨格筋で強発現しているRasファミリーGTP結合蛋白質Radの機能解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11680629
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 堀内 久徳 京都大学, 医学研究科, 助手 (90291426)
• Keywords: Rad / GTP結合蛋白質 / 糖尿病

Research Abstract

インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)患者骨格筋で強発現しているRasファミリーGTP結合蛋白質Radの機能を明を目標に研究を進めた。まず、骨格筋においてRadと結合する蛋白質を同定すべく、すでに作成・精製したGST-Radを用いたアフィニティークロマトグラフィーを試みたが、Radと会合している可能性のある蛋白質は同定できなかった。リガンドオーバーレイ法、すなわち、サンプルをSDS-PAGE後ニトロセルロース膜にブロットし、その膜上の蛋白質を界面活性剤等を用いてRenatureする。そして、その膜を[32P]GTP-Radと反応させ、洗浄後にオートラジオグラフィーで、[32P]GTP-Rad結合蛋白質を検出するという方法も不可能であった。抗Radモノクローナル抗体を作製し得たので、Radと共に免疫沈降される蛋白質を検索中である。

Research Products

• [Publications] H,Ozaki: "Combined treatment of TNF-α and INF-α causes redistribution of junctional adhesion molecule in human endothelial cells"J.Immunol.. 163. 553-557 (1999)
• [Publications] H.Yoshida: "Compensated endocytosis of LDL by hamster cells co-expressing the two distinct mutant LDL receptors defective in endocytosis and ligand binding"J.Lipid Res.. 40. 814-823 (1999)
• [Publications] T.Kita: "Oxidized LDL and expression of monocyte adhesion molecules"Diabetes Res.Clin.Practice. 45. 123-126 (1999)