糖尿病患者骨格筋で強発現しているRasファミリーGTP結合蛋白質Radの機能解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11680629
• Research Institution: KYOTO UNIVERSITY
• Principal Investigator: 堀内 久徳 京都大学, 医学研究科, 助手 (90291426)
• Keywords: Rad / GTP結合蛋白質 / 糖尿病 / 骨格筋

Research Abstract

インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)患者骨格筋で強発現しているRasファミリーGTP結合蛋白質Radの機能を明を目標に研究を進めた。まず、骨格筋においてRadと結合する蛋白質を同定すべく、すでに作成・精製したGST-Radを用いたアフィニティ-クロマトグラフィーを試みたが、Radと会合している可能性のある蛋白質は同定できなかった。リガンドオーバーレイ法、すなわち、サンプルをSDS-PAGE後ニトロセルロース膜にブロットし、その膜上の蛋白質を界面活性剤等を用いてRenatureする。そして、その膜を[32P]GTP-Radと反応させ、洗浄後にオートラジオグラフィーで、[32P]GTP-Rad結合蛋白質を検出するという方法も不可能であった。抗Radモノクローナル抗体を作製し得たので、Radと共に免疫沈降される蛋白質を検索中である。さらに、精製したGST-Radを[125I]ラベルし、さらに、骨格筋抽出液とクロスリンク実験を試み、数個のRad結合蛋白質の候補を確認している。現在、それらを、精製中である。

Research Products

• [Publications] H.Nishioka: "Small GTPase Rho regulates thrombin-induced platelet aggregation"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 280. 970-975 (2001)
• [Publications] R.Shirakawa: "Small GTPase Rab4 regulates Ca^<2+>-induced α-granule secretion in platelets"J.Biol.Chem.. 275. 33844-33849 (2000)