1999 Fiscal Year Annual Research Report
ノルアドレナリントランスポーター機能と蛋白発現のプロテインキナーゼによる調節機構
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11680763
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| Research Institution | Showa University |
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Principal Investigator |
木内 祐二 昭和大学, 薬学部, 教授 (50204821)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小山田 英人 昭和大学, 医学部, 助手 (50266160)
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| Keywords | ノルアドレナリントランスポーター / ノルアドレナリン再取り込み / Ca^<2+> / カルモジュリン依存性キナーゼII / 蛋白リン酸化 / 遺伝子発現 / トランスロケーション / PC12細胞 |
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| Research Abstract |
抗うつ薬の作用部位であるノルアドレナリントランスポーター(NAT)は蛋白リン酸化酵素、特にCa^<2+>/カルモジュリン依存性キナーゼII(CaMKII)を介して機能が促進される可能性があることを我々は以前報告している。今回はCaMKIIによるNAT機能の急性あるいは長期的な機能調整機能の詳細についてNATを発現するPC12細胞を用いて検討した。
1.PC12細胞のNATcDNA未同定部位を特定し、NATのN末端部に2ケ所、C末端領域に3ケ所のCaMキナーゼIIによるリン酸化推測部位を認めた。C末端領域の1ケ所を含むペプチドのみ精製CaMキナーゼIIによりリン酸化された。2.PC12細胞のNAT蛋白を抗NAT血清を用いて免疫染色し、その細胞内局在を共焦点レーザー顕微鏡を用いて解析した。神経突起および細胞体の細胞膜に限局したNAT様免疫活性はCaMKII阻害薬KN-93存在下あるいはCa^<2+>非存在下でインキュベーションした細胞では不明瞭化した。3.CaMキナーゼIIaを強制発現したPC12細胞のクローンでは、CaMキナーゼ活性とともにNA取り込みも著名に増加した。さらにこのクローンではNATmRNA発現量の著名な増加とリン酸化CREB量の増加も認められた。
以上よりCaMKII依存的なNAT機能促進の機序としてはNAT蛋白C末端部のCaMKIIによるリン酸化とともに、リン酸化によるNATの細胞膜上へのトランスロケーション増加が関与している可能性も示された。また、CaMKII強制発現クローンの結果より、CaMKIIは長期的にはNAT遺伝子の転写促進によりNA取り込みを促進的に調節している可能性が示唆された。
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Research Products
(1 results)
