1999 Fiscal Year Annual Research Report
抗血管内皮増殖因子リボザイムによるヒト膵癌肝転移遺伝子治療モデル
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11680825
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| Research Institution | Tokai University |
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Principal Investigator |
上山 義人 東海大学, 医学部, 助教授 (30072408)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 雅登 東海大学, 医学部, 講師 (00164335)
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| Keywords | 血管内皮増殖因子 / 肝転移モデル / 免疫不全動物 / 膵癌 / 遺伝子治療モデル / リボザイム |
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| Research Abstract |
平成11年度はVEGF189を特異的に分解するリボザイムの作成と膵癌培養細胞への組み込みを中心として実験を進めた。まず、ヒト膵癌株(MIAPaCa-2,Capan1等)より細胞全RNAを精製し、これを鋳型とした RT-PCR法によってVEGFmRNAのアイソフォームの発現形式を明らかにした。アイソフォーム解析のためにExon1〜Exon8およびExon4〜Exon7にプライマーを設計しPCRを行い、増幅されるcDNAフラグメントのサイズから各アイソフォームの有無を確認した。ついで、細胞関連型のVEGF189アイソフォームに特異的に存在するExon6の塩基配列を標的としたハンマーへッド型リボザイム(V189Rz)を作成し、人工的に作成したRNA基質を用い、このRz-1の特異性・切断活性をin vitroで解析し、至適pH、温度、Mg濃度を確認した。細胞関連型VEGF189の発現の確認された膵癌株を用い、in vitroで分解活性の確認されたリボザイムをベクターpHβに組み込む(pHβ/V189Rz,pHβ/dis-V189Rz)をリポフェクションにより遺伝子導入した。現在、RT-PCR・シークエンス解析でリボザイムの導入を確認し(MIA Paca-2/VR)、同定されたリボザイム導入細胞株を用いて細胞生物学的解析を行いつつある。
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[Publications] Okamoto K, et al.,: "Xenografts of human solid tumors frequently express cellular-assoclated isoform of vascular endothelial growth factor (VEGF) 189"Oncology Reports. 6. 1201-1204 (1999)
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[Publications] Lee Y H, et al.,: "Cell-retained isoforms of vascular endothelial growth factor (VEGF) are correlated with poor prognosis in osteosarcoma"European Journal of Cancer.. 35(7). 1089-1093 (1999)
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[Publications] Okamoto K, et al.,: "Inhibiton of liver metastasis of colon cancer by in vivo administration or anti-vascular endothelial growth factor antibody"Oncology Reports. 6. 553-556 (1999)
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[Publications] Tomisawa M, et al.: "Expression pattern of vascular endothelial growth factor isoform is closely correlated with tumour stage and vascularization in renal cell carcinoma"European Journal of Cancer.. 35(1). 133-137 (1999)
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[Publications] Tokunaga T, et al.: "Thrombospondin 2 expression is correlated with inhibition of angiogenesis and metastasis of colon cancer"British Journal of Cancer.. 79(2). 354-359 (1999)
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[Publications] Tsuchida T, et al.: "Hammerhead ribozyme specilically inhibits mutant K-ras mRNA of human pancreatic cancer cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. 253. 368-373 (1999)
