1999 Fiscal Year Annual Research Report
新規レポーター遺伝子による細胞内情報変換システムの解析
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11750683
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
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Principal Investigator |
斉藤 美佳子 東京農工大学, 工学部, 助手 (20291346)
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| Keywords | レポーター遺伝子 / 細胞内情報伝達 / ストレス応答性遺伝子 |
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| Research Abstract |
本研究はイネ培養細胞、あるいはタバコ培養細胞BY-2を用い、その化学的、物理的あるいは生物学的ストレスシグナルに対して発現する遺伝子を具体的な対象遺伝子とし、この遺伝子発現を指標として細胞内情報伝達のリアルタイム解析を目標としている。今年度は次の項目を実施した。
1.多機能型微小電極の高性能化:先端直径0.1μm以下、先端から50μmまでの直径10μm以下にすることができるようになったが、再現性という点では問題が残った。
2.プラスミド細胞内導入量の定量化:実験材料としてイネ培養細胞を用いた。カリフラワーモザイクウィルス35SRNAのプロモーターにグリーン蛍光タンパク質(GFP)を結合したプラスミドを(p35S-GEP)を加圧法によりイネ培養細胞に導入した。その結果、一日後にはGFPの蛍光が観察された。
次に、導入する遺伝子として、ストレス応答性遺伝子であるキチナーゼ遺伝子のプロモーター領域にGFPのcDNAを挿入したプラスミド(pCHI-GFP)を用いた。pCHIーGFPを細胞に導入した12時間後に化学的ストレスシグナルを与えたところ、約22%の細胞からGFPの蛍光が観察された。
3.新規ストレス応答性遺伝子の検索:これまでにストレス応答性遺伝子として知られているpin,PALについて調べたところ、キチナーゼの発現パターンとは異なり、全く誘導されなかった。そこで新たな遺伝子を検索するため、ディファレンシャル・ディスプレイ法を用いて調べた。その結果、複数の遺伝子が発現していることがわかった。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Hidekazu Sotoyama: "Control of the Cross Membrane Potential of a Cultured Tabacco Cell and Simultaneous Measurement of the Electrical Impedance of Its Membrane."Electrochemistry.. 67(1). 18-21 (1999)
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[Publications] Hideaki Matsuoka: "Control of the Quantity and the Timing of Microinjection into a Bio-Cell with a Multifunctional Microelectrode."Electrochim. Acta.. 44. 3801-3807 (1999)
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[Publications] Hideaki Matsuoka: "Effects of a pulsing electric signal on the Cross Membrane potential and the Cell Division potentiality of a Single Cell of Tabacco"Bioelectroche. Bioenerg.. 49. 65-72 (1999)
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[Publications] Mikako Saito: "Elicitor Action via Cell Membrane of a Cultured Rice Cell Demonstrated by the Single-Cell Transient Assay"J. Biotechnol.. 76. 227-232 (2000)
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[Publications] Mikako Saito: "pH-Microelectrode-micropipette system for the measurement of Enzyme Reaction in Picoliter Space of a Living Plant Cell."Anal. Chim. Acta.. 404(2). 223-229 (2000)
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[Publications] Mikako Saito: "Control of Ca^<2+> Influx into a Single Rice Cell with an Electric Signal."Electrochemistry. (in press).
