蛋白間相互作用による容量性Ca^<2+>流入調節機構の分子生物学的検討

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770042
• Research Institution: Akita University
• Principal Investigator: 佐藤 栄作 秋田大学, 医学部, 助手 (10282162)
• Keywords: TRP遺伝子 / 容量性Ca^<2+>流入 / イオンチャネル

Research Abstract

容量性Ca^<2+>流入機構は、血管内皮などの非興奮性細胞において、細胞の生理機能の調節に重要な役割を果たしているが、その調節機構については良く分かっていない。今年度、ヒト大動脈内皮細胞における容量性Ca^<2+>流入においてplasma membrane Ca^<2+>ATPaseが機能的な役割を果たしていることを報告した。本課題の目的は、容量性Ca^<2+>流入チャネルの分子本体の候補であるTRP関連蛋白質の細胞内分布およびチャネルとしての機能がPDZドメイン蛋白質との相互作用によってどのように変化するかを検討することである。本年度は、分子生物学的手法によって材料となるTRP遺伝子を得ることに注力した。具体的には、ラット脳cDNAから容量性Ca^<2+>流入を示すと報告されているRTRP(rat TRP4)の完全長cDNAを取得するため、RT-PCR法、RACE法によってスクリーニングを行った。このスクリーニングの過程で、既知RTRPとはその核酸配列の異なる数種類のクローンを得た。一つは、アミノ酸配列においてマウス、ウシ及びヒト型のTRP4と相同性の高いものでC末端にPDZドメイン蛋白と相互作用をする配列を有していた。その他のものは一部DNAが欠損したものでありスプライシングバリアントと推定した。この結果は第73回日本薬理学会年会において報告する。続いて、青色蛍光を発するBFPを発現するベクターにこのTRP4 cDNAを挿入したプラスミドを作成しており、現在、COS7細胞、293細胞を用いた発現実験によって、その細胞内分布とチャネルとしての機能評価を開始している。来年度は、TRP4と相互作用をするPDZドメイン蛋白cDNAをクローニングし、相互作用による容量性Ca^<2+>流入調節機構を検討する予定である。

Research Products

• [Publications] Miki Nakao, Ken-Ichi Furukawa, Eisaku Satoh, Kyoichi Ono, Toshihiko Iijima: "Inhibition by antisense oligonucleotides of plasma membrane Ca^<2+> ATPase in vascular endothelial cells"European Journal of Pharmacology. 387. 273-277 (2000)