1999 Fiscal Year Annual Research Report
胚性腫瘍細胞F9の分化における12-リポキシゲナーゼの役割の解明
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11770063
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
鈴木 啓史 徳島大学, 医学部, 講師 (80253194)
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| Keywords | リポキシゲナーゼ / アラキドン酸 / 胚性腫瘍細胞 / F9 / P19 / 胚発生 / 神経細胞 / 偽遺伝子 |
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| Research Abstract |
F9細胞を5x10^<-8>Mレチノイン酸を加えた培地中で近位内胚葉細胞に、また、10^<-7>Mレチノイン酸と10^<-3>MジブチリルcAMPの存在下で遠位内胚葉細胞に分化させた後に、アラキドン酸を基質としてリポキシゲナーゼ活性を測定したところ、未分化細胞と比べて顕著な比活性の上昇は認められなかった。遠心分画により酵素活性が主に1万xg沈殿に回収され、これまでの報告とあわせると、血小板型12-リポキシゲナーゼの細胞質から膜画分への移行が示唆された。RT-PCR法を用いてマウス血小板型12-リポキシゲナーゼの全長のcDNAをクローニングし、発現ベクターに組み込みHEK293細胞で発現させたところ、12-リポキシゲナーゼ活性を検出できた。これにより、以前にRT-PCR法で得たcDNA部分断片が、これまでに報告されていた12-リポキシゲナーゼ偽遺伝子由来ではないことが確認できた。細胞分化マーカーとして、転写因子Oct-3,BrachyuryなどのcDNA断片をRT-PCR法で得て、リボプローブを用いたノーザンブロット法を確立した。ETYA,NDGAなどのリポキシゲナーゼ阻害剤存在下でF9細胞を培養したところ、0.1μMの低濃度阻害剤により細胞死が引き起こされた。P19細胞は、F9細胞と同様の手法で樹立されたマウス胚性腫瘍細胞であるが、加えるレチノイン酸の濃度に応じて、心筋細胞、骨格筋細胞、神経細胞と異なる細胞系に分化する。神経細胞への分化過程でP19細胞にリポキシゲナーゼ活性を認めたので、アイソザイムの同定と発現誘導を調べると共に、細胞分化との関与を調べる予定である。
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[Publications] Huang,H.-S: "Inhibitory effect of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase on the activity of lipoxygenases and cyclooxygenases"Prostaglandins & other Lipid Mediators. 58. 65 (1999)
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[Publications] Goparaju,S.K.: "Anandamide amidohydrolase of porcine brain: cDNA cloning,functional expression and site-directed mutagenesis"Biochim,Biophys.Acta. 1441. 77-84 (1999)
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[Publications] Juranek,I.: "Affinities of various mammalian arachidonate lipoxygenases and cyclooxygenases for molecular oxygen as substrate"Biochim.Biophys.Acta. 1436. 509-518 (1999)
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[Publications] Yamamoto,S.: "Arachidonate 12-lipoxgenase isozymes.Lipoxygenases and Their Metabolites"Plenum Press,New York. 8 (1999)
