レトロウイルス逆転写におけるtopoisomerase Iの作用機序の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770127
• Research Institution: National Institute of Infectious Diseases
• Principal Investigator: 高橋 秀宗 国立感染症研究所, 感染病理部, 室長 (70260271)
• Keywords: レトロウイルス / RNAの安定性 / topoisomerase I

Research Abstract

昨年度までの研究によりレトロウイルスの逆転写において宿主topoisomerase Iの特にライゲース活性が重要であることを見出した。さらに他の宿主因子の関与を調べるためにtopoisomerase IとN末端で結合する因子のうちC23及びPSFのHIV-1複製における関与を調べた。COS1細胞にinfectiousclone DNAとそれぞれの発現ベクターをコトランスフェクションしたところ、C23を発現させたときのみ、ウイルス蛋白の発現が上昇することが判明した。RNAの転写効率自体はC23発現に関わらず不変であったため、アクチノマイシンDによって転写を阻害しRNAの安定性をRT-PCRによって調べたところ、C23の発現によりゲノムRNAの安定性が増すことが判明した。また上精中のウイルス粒子もC23の発現により4倍程度上昇することが判明した。以上より、C23は何らかの機構によりゲノムRNAの安定性を増し、ウイルス粒子を経た感染細胞での逆転写に影響を及ぼしていることが示唆された。C23が粒子へ取り込まれていくか、ウイルス発芽へ影響を及ぼしているか、また粒子に取り込まれるtopoisomerase Iとの相互作用が必須であるか等さらに解析が必要であると考えられた。

Research Products

• [Publications] Takahashi,H.,Iwata,T.,Kitagawa,Y.,Shoya,Y.,Takahashi,RH.,Nagashima,K.,Kurata,T.: "Monoclonal antibodies against topoisomerase I suppressed DNA relaxation and HIV-1 cDNA synthesis."Hybridoma. 19. 331-334 (2000)
• [Publications] Hasegawa,H.,Kadowaki,S.,Takahashi,H.,Iwasaki,T.,Tamura,S.,Kurata,T..:: "Protection against influenza virus infection by nasal vaccination in advance of sublethal irradiation"Vaccine. 18. 2560-2565 (2000)
• [Publications] Kenny K,Brechtel C,Takahashi H,Kurohara K,Anderson P,Gibbs CJ Jr.: "An enzyme-linked immunosorbent assay to quantify 14-3-3 proteins in the cerebrospinal fluid of suspected Creutzfeldt-Jakob disease patients."Ann Neurol.. 48. 395-398 (2000)