1999 Fiscal Year Annual Research Report
黄色ブドウ球菌が産生する毒素(酵素)の分泌機構に関する研究
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11770138
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
堀井 俊伸 名古屋大学, 医学部, 助手 (80283430)
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| Keywords | 黄色ブドウ球菌 / メチシリン耐性黄色ブドウ球菌 / 分泌機構 / Sec因子 / SecA / 外毒素 / 菌体外酵素 / スタフィロキナーゼ |
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| Research Abstract |
黄色ブドウ球菌は、腸管毒、TSST-1、コアグラーゼなど様々な毒素(酵素)を産生する。我々は、黄色ブドウ球菌における毒素(酵素)の分泌機構を明らかにするにあたり、多くの黄色ブドウ球菌が産生し、N末端にシグナルペプチドを有する分泌酵素であるスタフィロキナーゼに着目した。
まず、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)NU3-1株が産生するスラフィロキナーゼ(Sak)を精製し、家兎を用いて抗Sak抗体を作製した。さらに、スタフィロキナーゼ(Sak)遺伝子の遺伝学的背景を明らかにする目的で、MRSANU3-1株からsak遺伝子およびその上・下流域をクローニングし、15600-bpにわたる領域の塩基配列を決定した。その結果、sak遺伝子は、バクテリオファージのゲノムに由来し、バクテリオファージが溶菌するときに必要な細胞壁分解酵素N-acetylmuramyl-L-alanine amidaseをコードする遺伝子plyのopen reading frameのなかに割り込んで存在していた。このような構造は、6株のMRSAのうち5株に認められた。これら6株において、培養上清中のSakの量は、immunoblottingの結果から同程度であった(Horii T et al.FEMS Microbiology Letters,in press)。
次に、MRSANU3-1株から、Sec因子のひとつであるtranslocation ATPaseサブユニットをコードするsecA遺伝子のクローニングに成功した。secA遺伝子およびその上・下流域を約4-kbにわたり塩基配列の決定を行った。上流域には、secA遺伝子の調節遺伝子であると考えられるgeneX遺伝子が存在していた。現在、遺伝子型の異なるMRSA臨床分離株6株を用いて、secA遺伝子の調節領域の解析と、geneX遺伝子およびsecA遺伝子の発現についての解析を行っている。さらに、黄色ブドウ球菌RN4220株とベクターpYT3を用いて、geneX^-のisogenic mutantを作製し、毒素(酵素)の分泌におけるgeneX遺伝子の役割について解析を行っている。
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[Publications] Toshinobu Horii: "β-Lactamase inhibitors have antibacterial activities against Helicobacter pylori."Journal of Infection and Chemotherapy. 5. 206-207 (1999)
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[Publications] Toshinobu Horii: "Medium compositions and culture conditions for the assay of fosfomycin susceptibility by Etest."Journal of Infection and Chemotherapy. 6(in press). (2000)
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[Publications] Toshinobu Horii: "The staphylokinase gene is located in the structural gene coding for N-acetylmuramyl-L-alanine amidase in methicillin-resistant Staphylococcus aureus."FEMS Microbiology Letters. (in press). (2000)
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[Publications] 堀井 敏伸: "特集・クラスB,クラスC β-ラクタマーゼ産生菌の最新動向"インフェクションコントロール. 9・5(発表予定). (2000)
