ウエルシュ菌エンテロトキシン受容体の膜孔形成機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770140
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 片平 じゅん 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30263312)
• Keywords: 膜孔形成性細菌毒素 / 受容体 / 食中毒 / トポロジー

Research Abstract

1.CPE結合部位の同定
前年度に明らかにしたCPE受容体の2番目の細胞外領域が、毒素感受性に必須であるという知見に基づき、同領域とグルタチオンSトランスフェラーゼの組換え融合タンパクを発現・精製し、CPEをプローブとして用いたリガンドブロット法を行なった.その結果、この領域にCPEが直接結合することを明らかにできた.スキャッチャード・プロットの解析から、同領域とCPEとの結合の親和性は、1.0×10^8M^<-1>とCPE受容体発現細胞に対する結合親和性とほぼ等しいことを明らかにした.したがって、CPE受容体の2番目の細胞外領域が、CPEの結合部位として機能すると結論付けた.
2.CPE受容体の大量発現系の確立
CPE受容体のバキュロウイルスでの大量発現系を確立した.培養液1Lあたり約0.1mgのCPEが得られた.現在、CPEの膜孔形成機構をさらに詳細に解析するために、精製CPE受容体をリポソーム中に再構築し、無細胞系でのCPEの機能アッセイの確立を試みている.

Research Products

• [Publications] Fujita,K.,Katahira,J., et al.: "Clostridium perfringens enterotoxin binds to the second extracellular loop of Claudin-3, a tight juncition integral membrane protein"FEBS Letters. 476. 258-261 (2000)