環境ホルモンコプラナーPCBによる細胞質チロシンホスファターゼの抑制メカニズム

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770183
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 石井 祐次 九州大学, 大学院・薬学研究院, 助手 (90253468)
• Keywords: polychlorinated biphenyl / dioxin / carbonic anhydrase / suppression / phosphatase / gene regulation / liver / apoptosis

Research Abstract

環境ホルモンコプラナーPCBによる細胞質チロシンフォスファターゼ、肝臓型カルボニックアンヒドラーゼIII(CAIII)の抑制メカニズムを明らかにすることを目的として、まずCAIIIを高発現しておりラット肝臓由来の細胞を見出した。ラットH4IIE細胞はCAIIIの発現は高くなく、CAIIIの構成的な発現に必要な転写調節が行われていないと思われた。そこで、ラットより初代培養肝細胞を調製し、CAIIIの発現を調べると共に、3,3',4,4',5-pentachlorobiphenyl(PCB126)処理の影響も調べた。初代培養肝細胞におけるCAIIIの発現レベルは、in vivoに比べて低いものであったが、PCB126にレスポンスした発現抑制が認められた。このことから、初代培養肝細胞系が、PCB126によるCAIIIの発現抑制の研究に利用可能であると考えられた。次に、CAIIIの遺伝子発現調節領域をクローン化した。ヒトとマウスのCAIIIプロモーターの配列には、保存された領域があることから、ラットにおいても保存されている可能性があった。ラット肝臓からゲノムDNAを調製し、この配列を基にラットCAIIIプロモーターをPCR増幅した。PCR産物はダイレクトシーケンスによって配列を決定し、また、TA-cloningによって、subcloningを行った。得られたCAIII遺伝子の5'-上流域1.5kbの塩基配列を、モチーフ解析したところ、肝特異的に発現する遺伝子によく見られるCCAAT enhancer binding protein(C/EBP)結合エレメントと、xenobiotic responsive element(XRE)と呼ばれるAh-レセプター(AhR)に対する応答配列が独立して存在していた。

Research Products

• [Publications] Ikeda,M.,Ishii,Y. et al: "Suppression of Carbonic Anhydrase III in Rat Liver by a Dioxin-Related Toxic Compound, Coplanar Polychlorinated biphenyl, 3,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl"Archives of Biochemistry and Biophysics. 380(1). 159-164 (2000)