膵腺房細胞アポトーシスとG1サイクリン発現に関する解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770278
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 阪上 順一 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (30305578)
• Keywords: 膵腺房細胞 / アポトーシス / G_1サイクリン / CCK / PCNA / CYCLIN D_1 / PAP

Research Abstract

Wistar系雄性ラットにL-arginine monohydrochloride(Arg)4.5/kg体重を単回腹腔内投与し、急性膵炎を作成した.このモデルは3日目までが急性膵炎進展期であり,急激に膵重量が減少し,組織学的にはduct-like tubular complexを呈するようになる.0,0.25,0.5,1,3,5,7,9,11,14日目に屠殺し、膵を摘出して組織学的・生化学的検索に供した。併せて、CCK受容体拮抗剤・CR1505 50mg/kg体重を6日目から1日2回皮下投与した群と比較を行った。屠殺1時間前にBrdUmg/kg体重を静注した.CR1505を急性膵炎回復期初期に投与開始した上記の群については、膵再生が抑制されたが、この際腺房細胞のBrdU標識率は無処置群に対して,有意な低値をとった.他方,腺房細胞のTUNEL陽性率は無処置群に比し高値を示すものの,統計学的に有意ではなかった.また,急性膵炎回復期である7〜11日の血漿CCKと腺房細胞のBrdU標識率との間には有意な正の相関(r=0.555,p<0.001)があったが,血漿CCkと腺房細胞のTUNEL陽性率との間には有意な負の相関が得られなかった.急性膵炎の進展期(12時間後)に膵腺房細胞のBrdU標識率は上昇をみなかった(0.27±0.17%)にもかかわらず,PCNA陽性率は急激に上昇し(15.3±1.85%),Western blottingでは71kDの部位に強い発現を認めた(Dig Dis Sci 41(9):1828^〜1837,1996).急性膵炎進展期における腺房細胞のPCNA(36kD)は,polymericであるかcyclin D_1(35kD)などのG_1 cyclinとの複合体として増加していることが想定された.従って,引き続き急性膵炎進展期におけるcyclin D_1mRNAの発現を確認した.すなわち,Arg 4.5g/kg体重を単回腹腔内投与後0、0.25、0.5日目に膵を摘出しAGPC法によりTotal RNAを抽出し,RT-PCR法によりcyclin D_1mRNAの発現を内部標準G3PDH mRNAとの比(RGU:Relative Gene Unit)によって確認した.急性膵炎進展期のマーカーとしてPAP(pancreatitis associated protein)mRNAを併せて検出した.急性膵炎の進展に平行して,PAPmRNAは0.3846RGU(0日),0.9103RGU(0.25日),1.3636RGU(0.5日)と上昇した.この際,cyclin D_1mRNAは0.029RGU(0日),0.1837RGU(0.25日),0.9506RGU(0.5日)と基礎値の32.8倍に箸増した.急性膵炎進展期にG_1サイクリンであるPCNAやcyclin D_1の発現が増加することが確認され,急性膵炎進展期における腺房細胞の一部がG_0期から一旦G_1期に入り死滅する可能性が示唆された.

Research Products

• [Publications] K.Kataoka,M.Harada,H.Yasuda,J.Sakagami: "Assessment of exscrine panereatic dysfunction in chronic panereatitis"Digestion. 60(Supplsu). 86-92 (1999)
• [Publications] J.Sakagami,K.Kataoka,K.Kashima: "Gastrointestinal and endocrine hormones in alcoholic pancreatitis"Kan Tan Sui. 40(1). 141-149 (2000)
• [Publications] 阪上順一、加嶋 敬: "最新主要文献と解説-膵疾患"認定医専門医のための内科学レビュー. 1版1刷. 119-126 (2000)