1999 Fiscal Year Annual Research Report
患者血清を用いたSEREX法による脳腫瘍特異抗原遺伝子の単離の試み
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11770773
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
戸田 正博 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
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| Keywords | 脳腫瘍 / グリオーマ / 腫瘍抗原 / 遺伝子 / クローニング / 血清 / ファージベクター / SEREX |
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| Research Abstract |
悪性脳腫瘍グリオーマに対する特異抗原を同定するために、autologous typingに分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigensby recombinant expression cloning)法を試みた。グリオーマは臨床病理学的にgrade I〜grade IVまでに分類されるが、おもにgrade III(anaplastic astrocytoma)およびgrade IV(glioblastoma multiforme)の患者から腫瘍および血清をサンプリングした。
(脳腫瘍組織からcDNA libraryの作製)腫瘍組織からのtotalRNA調製はAcid Guanidinium-Phenol-Chloroform法を用いて行い、さらにPoly(A)+RNAはOligo(dT)ラテックス粒子を用いて精製した。First-strand cDNAをoligo(dT)primerを用いて合成し、EcoR I adaptorを付加した後、Xho I処理した。得られたcDNAfragmentはファージベクターであるλZAP II(Strategene)に組み込んだ。各ライブラリーにつき、最低1X10^6の独立したクローン調製を行い、スクリーニングを行なった。
(患者血清を用いたcDNA libraryのスクリーニング)λZAP IIファージをプレーティングした後、ニトロセルロース膜にブロットした。スキムミルクでブロッキング後、患者血清(1:100希釈)と一晩反応させて、2次抗体、発色と反応を進め、陽性クローンをpick upした。現在、得られた陽性クローンの塩基配列を解析中である。
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[Publications] Toda, M, et al: "Suppression of glial tumor growth expression of glial fibrillary acidic protein"Neurochem. Res.. 24. 339-343 (1999)
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[Publications] Toda, M, et al: "Intratumoral inoculation of IL-12 defective vector-replication-competent herpes simplex virus combination induces antitumor immunity"Proc. Am. Assoc. Cancer Res.. 40. 257 (1999)
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[Publications] Toda, M, et al: "Herpes simplex virus as an 'in situ cancer vaccine' for the induction of specific antitumor immunity"Hum. Gene Ther.. 10. 383-393 (1999)
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[Publications] Toda, M, et al: "Suppression of an actin-binding protein,drebrin,by antisense transfection attenuates neurite outgrowth in neuroblastoma B104 cells"Dev. Brain Res.. 114. 193-200 (1999)
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[Publications] Toda, M, et al: "Regulation of growth in glial tumor by glial fibrillary acidic protein"Recent Res. Devel. Neurochem.. 2. 63-69 (1999)
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[Publications] Hunter WD, Toda M, et al: "Attenuated, Replication-Competent Herpes Simplex Virus Type 1 Mutant G207 : Safety Evaluation of Intracerebral Injection in Nonhuman Primates"J. Virol.. 73. 6319-6326 (1999)
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[Publications] Toda, M.,et al: "Neural Development"Springer-Verlag. 544 (1999)
