患者血清を用いたSEREX法による脳腫瘍特異抗原遺伝子の単離の試み

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770773
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 戸田 正博 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (20217508)
• Keywords: グリオーマ / 脳腫瘍 / 抗原 / 遺伝子 / 血清 / 癌

Research Abstract

悪性脳腫瘍(グリオーマ)は極めて治療困難な疾患であり、新たな治療法の開発が強く望まれている。本研究では、グリオーマに対する新しい免疫療法の開発を目的として、癌患者血清で患者自身の癌細胞を検索する方法に、分子生物学的手法を取り入れたSEREX(Serological identification of antigens by recombinant expression cloning)法によるヒトグリオーマ特異的抗原遺伝子の単離を試みた。
2種類のグリオーマ細胞株からmRNAを抽出し、cDNAを合成した後、λZAPIIファージに組み込みcDNA libraryを作製した。患者血清一人あたり5x10^5個のファージをプレーティングした後、ニトロセルロース膜にプロットし、グリオーマ患者血清(1:100希釈)と反応させて、陽性クローンを単離した。12人のグリオーマ患者血清を用いてスクリーニングした結果、92個の陽性クローンを単離した。塩基配列解析により、それらの抗原は52種類の遺伝子をコードしていることが明らかになった。さらに単離された抗原を、様々な患者(グリオーマ患者、他の癌患者、他の脳疾患患者、および健常人)血清中IgGとの反応を解析したところ、 2種の新規遺伝子を含む、7種の遺伝子産物はグリオーマ患者血清とのみ反応を示した。
以上、本研究ではSEREX法を用いて、グリオーマ患者血清中IgGに特異的に反応する抗原遺伝子を単離した。

Research Products

• [Publications] Toda,M.: "Suppression of glial tumor growth by expression of glial fibrillary acidic protein."Neurochem.Res.. 24. 339-343 (1999)
• [Publications] Toda,M.: "Herpes simplex virus as an' in situ cancer vaccine' for the induction of specific antitumor immunity."Hum.Gene Ther.. 10. 383-393 (1999)
• [Publications] Toda,M. : "Suppression of an actin-binding protein, drebrin, by antisense transfection attenuates neurite outgrowth in neuroblastoma B104 cells."Dev.Brain Res.. 114. 193-200 (1999)
• [Publications] Toda,M.: "Regulation of growth in glial tumor by glial fibrillary acidic protein."Recent Res.Devel.Neurochem.. 2. 63-69 (1999)
• [Publications] Hunter WD: "Attenuated, Replication-Competent Herpes Simplex Virus Type 1 Mutant G207 : Safety Evaluation of Intracerebral Injection in Nonhuman Primates."J.Virol.. 73. 6319-6326 (1999)
• [Publications] Kojima,H.: "Anti-Thy-1 mAb-triggered FasL/Fas-mediated cytotoxicity of T cells requires intact TCR/CD3 signaling pathway. Lower threshold for triggering of Fas-mediated versus perforin-mediated cytotoxicity."Int.Immunol.. 12. 365-374 (2000)
• [Publications] Toda,M.: "Tumor growth inhibition by intratumoral inoculation of defective herpes simplex virus vectors expressing granulocyte-macrophage colony-stimulating factor."Mol Ther. 2. 324-329 (2000)
• [Publications] Toda,M.: "Combination Suicide/cytokine gene therapy as adjuvants to a Defective Herpes Simplex Virus-Based Cancer Vaccine."Gene Ther. (in press). (2001)
• [Publications] Toda,M.: "Expression of the Neural RNA-Binding Protein Musashi1 in Human Gliomas."Glia. (in press). (2001)
• [Publications] Toda,M.: "Neural Development"Springer-Verlag. 544 (1999)
• [Publications] Toda,M: "Current Topics in Biochemical Research"Research Trends. 402 (1999)