1999 Fiscal Year Annual Research Report
神経栄養因子発現ベクター導入による脊髄損傷の遺伝子治療に関する基礎的研究
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11770796
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| Research Institution | 福井医科大学 |
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Principal Investigator |
内田 研造 福井医科大学, 医学部, 助手 (60273009)
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| Keywords | 神経栄養因子 / 脊髄損傷 / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
1)損傷モデルラットの作製とベクター注入:14-16週齢雄性Wister Rat(体重:400-500g)を用い、麻酔下にTh8,Th9椎弓切除を行い、硬膜外より60gの重錘で1分間圧迫し脊髄不全損傷モデルを作製した。損傷直後、BDNF-Myc-His/pIRES-EGFP vectorを損傷部位へマイクロシリンジで1μlmin^<-1>(total 10μl)の髄内投与を行った。
2)組織化学的観察:損傷後、24hr、3day、5day、8day、11day、14day後に灌流固定を行い、凍結連続横断切片を作製し、免疫組織学的に観察した。
注入された試薬(GFP陽性領域)は灰白質内に停滞しており、経時的に減少していった。その周囲の灰白質、白質にはGFP陽性細胞が散在しており、その数は損傷後3、5日でピークでありその後減少していった。抗BDNF抗体陽性細胞は損傷後増加、以後プラトーとなっており、損傷後3、5日では全GFP陽性細胞が抗BDNF抗体陽性となっていた(陽性率100%)。抗GFAP抗体陽性細胞も同様に損傷後3、5日で増加し8日目ではGFP陽性細胞よりも有意に増加、14日ではGFP陰性細胞が46%〜65%を占めていた。
脊髄損傷に対する遺伝子治療の試みとしてはその導入効率の点からウイルスベクターを用いたものが散見される。しかしながら今回行ったリポフェクチン法による脊髄組織への直接注入でもある程度の導入が可能であることが明らかになった。損傷によって出現した反応性アストロサイトにも内因性BDNFが発現すると予想されるが、今回の検討では導入された遺伝子はその殆どが反応性アストロサイトに貧食され、BDNF発現の増強効果に関与するものと考えられた。アストロサイト-ニューロンの細胞間情報伝達を考慮すれば、導入された遺伝子は神経細胞の生存維持と可塑性に寄与する可能性が実験的に示唆された。
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Research Products
(1 results)
