組織特異的プロモーターを用いた軟骨肉腫の遺伝子治療法の確立

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11770798
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 名井 陽 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10263261)
• Keywords: 軟骨肉腫 / 遺伝子治療 / XI型コラーゲン / 組織特異的プロモーター / チミジンキナーゼ / ガンシクロビル / GFP

Research Abstract

1.軟骨肉腫由来細胞株のキャラクタリゼーション
ヒト粘液型軟骨肉腫より樹立した細胞株のキャラクタリゼーションを行った。増殖速度ではHCS-TG/C3、HCS-TG/E2の2株が10%ウシ胎児血清+10%子牛血清存在下でよく増殖し、特にC3が良好であった。コラーゲンの産生は各種コラーゲン鎖に対するspecific primerを用いて RT-PCRにて検討した。C3、E2両株ともI型、II型、IX型、X型、XI型コラーゲンを産生していた。プラテオグリカン産生は各細胞を高濃度で2週間培養した後、アルシアンブルーにて染色を行い色素を抽出して比色定量を行った。C3、E2両株ともプロテオグリカンを産生していたがその量はE2の方が多かった。以上の結果よりHCS-TG/C3、HCS-TG/E2の2株は、軟骨細胞の性格を有し、in vitroで良好な増殖を示すことがわかり、今後のXI型コラーゲンプロモーターを使用した軟骨肉腫の治療実験に有用と考えられた。
2.軟骨特異的XI型コラーゲンalpha 1鎖のプロモーターを含むHSV-TK発現ベクターの作成
教室でクローニングしたXI型コラーゲンalpha 1鎖のプロモーターと第一イントロンをプロモーターを持たないベクターpNASSβに挿入した(pColXIa1)。現在、抗ガン剤ガンシクロビルを活性化する Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase(HSV-TK)遺伝子の下流にクラゲ蛍光蛋白GFP遺伝子をin frame で挿入したTK-GFPをpColXIa1のプロモーターとイントロンの間に挿入することを試みている。

Research Products

• [Publications] Araki N.,Myoui A.et al.: "Intraoperative extracorporeal autogenous irradiated bone grafts in tumor surgery"Clinical orthopaedics.. 368. 196-206 (1999)
• [Publications] Yoshikawa H.,Myoui A.et al.: "Bone metastases from soft tissue sarcomas"Seminars in musculoskeletal radiology. 3. 183-189 (1999)