2000 Fiscal Year Annual Research Report
尿路結石発生メカニズムの解明と再発予防に関する基礎的研究
| Project/Area Number |
11770916
|
|---|
| Research Institution | Kurume University |
|---|
Principal Investigator |
飯田 如 久留米大学, 医学部, 講師 (70232121)
|
|---|
| Keywords | 蓚酸カルシウム / MDCK細胞 / 細胞内カルシウムイオン / heparan sulfate / syndecan-1 |
|---|
| Research Abstract |
平成11年度は、蓚酸カルシウム結石形成ラット腎組織における(HSPG)syndecan-1の発現が有意に亢進していることを証明した。(Iida S et al.J Am Soc Nephrol.1999)平成12年度は、ヒト前立腺癌細胞株よりsyndecan-1 cDNAのcloningを行い、この遺伝子を含んだ蛋白発現ベクターを犬の尿細管上皮細胞(MDCK cells)に導入し、ヒトsyndecan-1を発現する細胞株を樹立した。この細胞は、遺伝子レベルでも蛋白レベルにおいてもヒトsyndecan-1を発現していることが証明された。また、蓚酸イオン存在下での細胞内カルシウムイオンの変化を調べた。細胞をOregon Green BAPTA-1AMにて染色し、蛍光顕微鏡で観察しながらリアルタイムで細胞内カルシウムイオン濃度の測定をおこなった。その結果、細胞外に蓚酸(0.5-2.0mM)を還流液に添加すると、細胞内カルシウムは減少することがわかった。一方、同じ細胞株をheparinもしくはheparan sulfateで処理した場合、細胞内カルシウムの減少は阻止された。蓚酸添加時に、細胞内カルシウムが減少する原因として、おそらく蓚酸イオンが細胞内カルシウムイオンと結合し、細胞内での蓚酸カルシウムの結晶形成が始まるからではないかと考えた。そして、高分子インヒビターであるheparinもしくはheparan sulfateが、その強力な陰イオン・チャージにより蓚酸イオンの細胞内流入を阻止するためと考えられた。今後これらを証明するため、電子顕微鏡による観察を行う予定である。
|
Research Products
(1 results)
