耳下腺腺房細胞におけるVAMP2を介するアミラーゼ分泌の制御機構

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11771148
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 吉垣 純子 日本大学, 松戸歯学部, 助手 (40256904)
• Keywords: 分泌 / 唾液腺 / cAMP / 開口放出 / 分泌顆粒

Research Abstract

本研究では,耳下腺腺房細胞における刺激応答性アミラーゼ分泌の分子機構の解明を目的として,SNAREタンパク質の一つであるVAMP2の機能調節について解析を行っている.我々は既に,非刺激時には分泌顆粒膜に存在する何らかのタンパク質XがVAMP2に結合しており,腺腔膜側に存在するt-SNAREとの結合を妨げていることを見いだしている.このVAMP2の複合体は,cAMP依存性プロティンキナーゼ(PKA)の活性化によって解離する.これにより,VAMP2とt-SNAREの結合が可能になり,開口放出が引き起こされると予測される.今回VAMP2とXの複合体の性質について解析を行った.このVAMP2複合体が,分泌膜顆粒膜上に存在するSNARE複合体であり,PKAによる解離はNSFによるプライミングである可能性について検討した.VAMP2タンパク質は,ボツリヌストキシンB(BNT-B)のプロテアーゼ活性によって特異的に切断されるが,SNARE複合体形成時には切断されないことが知られている.そこで,可溶化した分泌顆粒膜に含まれているVAMP2がBNT-Bによって切断されるかどうか検討したところ,VAMP2は効率よく切断された.したがって,分泌顆粒上に存在するVAMP2複合体は,SNARE複合体ではないことが予測される.また,VAMP2複合体の解離に対するATPアナログの効果を検討した.ATPアナログの一つであるATPγSはPKAの基質になりうるが,NSFによるSNARE複合体の解離は阻害することが知られている.耳下腺に存在するVAMP2複合体の解離は,ATPの代わりにATPγSを用いても効率よく引き起こされた.したがって,この反応にはNSFは必要ではないといえる.これらのことから,分泌顆粒上に存在するVAMP2複合体はSNARE複合体ではなく,VAMP2の機能発現を担う新しい複合体であると考えられる.

Research Products

• [Publications] J Fijita-Yshigaki,Y Dohke,M Hara-Yokoyama et al: "Presence of a complex containing vesicle-associated membrane protein 2 in rat parotid・・・・"Journal of Biological Chemistry.
• [Publications] J Fujita-Yoshigaki: "Stimulation of regulated exocytosis of amylase from salivary parotid acinar cells by a consecuticve reaction model・・・・"Journal of Theoretical Biology. (in press).