EOP患者由来好中球におけるDGKの塩基配列の多型性と好中球機能低下の関わり

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11771359
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 前田 博史 岡山大学, 歯学部・附属病院, 助手 (00274001)
• Keywords: diacylglycerol kinase / 早期発症型歯周炎 / 遺伝子多型性 / 遺伝子構造

Research Abstract

1.DGK遺伝子の構造解析
DGK遺伝子の構造解析を行った。DGK遺伝子のゲノムクローン(札幌医科大学、坂根博士から恵与)上で、これまでイントロンとして報告されており、未だその塩基配列が解析されていない領域の塩基配列を決定した。preliminary dataとしてDGK-αのcDNAエクソン1領域には多型性のあることが分かっていたが、これまでの報告と異なったエクソン1領域の塩基配列は同一遺伝子上のイントロンとして報告されていた領域に存在した(既報のエクソン1とエクソン2の間)。また、primer extension法によって新しいエクソン1の転写開始点を決定した。予想されるプロモーター領域はGC richな構造を持っており、DGK-α遺伝子は複数の転写開始点を持つことが明らかとなった。
2.DGK遺伝子の多型性の解析
健常者7人と早期発症型歯周炎患者15人のDGK-αcDNAの多型性を調べた。一人の患者にcDNA上の変異(多型性)が存在した。この変異はDGKのcatalytic domainに存在したが、そのアミノ酸配列を変えるものではなかった。すなわち、早期発症型歯周炎患者にみられる好中球のDGK酵素活性の低下はこの分子の構造変化によるものではないことが示唆された。そこで、DGK分子の発現量をNorthern Blot法で調べた。その結果、早期発症型歯周炎患者ではFMLP刺激下でDGKの発現量が低下する傾向があった。さらに、早期発症型歯周炎患者のプロモーター領域(既報の-850〜 +50領域)には多型性のあることが分かった。とくに-850〜 -800の領域において多型性のみられることが多かった。

Research Products

• [Publications] H. NASSAR: "Characterization of diacylglycerol kinase gene in neutrophils"Journal of Dental Research. 78(Special issue). 353 (1999)
• [Publications] 前田 博史: "Diacylglycerol kinase-α遺伝子の構造解析"日本歯周病学会誌. 41(春季特別号). 138 (1999)
• [Publications] K. SAWADA: "Identification by Subtractive Hybridization of a Novel Insertion Sequence Specific for Virulent Strain of Porphyromonas gingivalis"Infection AND Immunity. 67(11). 5621-5625 (1999)
• [Publications] 錦城 哲二: "細菌16SリボゾームRNA遺伝子を用いた歯周病細菌の同定"日本歯科保存学雑誌. 42(6). 1108-1115 (1999)