2000 Fiscal Year Annual Research Report
株化細胞の分化過程に対する内分泌攪乱物質の影響評価法の開発
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11780395
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| Research Institution | Tokyo University of Pharmacy and Life Science |
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Principal Investigator |
吉見 立也 東京薬科大学, 生命科学部, 助手 (30277256)
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| Keywords | 肺 / 分化 / 内分泌攪乱化学物質 / M3E3 / C3 / エストロゲンレセプター / HNF3 / サーファクタント / クララ細胞 |
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| Research Abstract |
1.M3E3/C3細胞の変化の検出
【all-transレチノール添加】 細胞を、レチノールを加えた条件において分化誘導培養を行い、肺の分化マーカーであるサーファクタント蛋白Sp-BとSp-C、及びCCSP(クララ細胞特異的分泌タンパク質)、HNF3α(肝細胞核因子)についてmRNAの発現変化を定量PCRによって検出する系を確立した。細胞は肺のクララ細胞様の分化形質を示すことがわかった。
【hypoxia条件】 hypoxia条件において分化誘導培養を行い、神経内分泌細胞の分化マーカーであるクロモグラニンAについて発現変化をPCRによって検出する系を確立した。この結果、細胞は肺のNeuroendocrine細胞様の分化形質を示すことが示唆された。
2.ホルモン様物質の暴露による影響
上記の細胞分化系にエストラジオールを添加すると、Sp-B、及びCCSPの発現が減少したが、Sp-Cについては増加した。また、クロモグラニンAの発現はエストラジオールにより減少することがわかった。
3.調節因子の解析
ホルモン様物質が分化の更に上流に与える影響を探るために、肺における転写調節を行っている因子(HNF3α、TTF-1)について、PCRにより検出したところ、細胞分化に伴い発現は増加した。
4.エストロゲンレセプターの発現解析
ER-αについてはM3E3/C3細胞サンプルにおいて発現が検出されたが、エストラジオール添加による影響はみられなかった。β型レセプターの検出を試みたが発現量が少なく検出が困難であった。
5.エストロゲンの影響の解析
エストラジオールの影響は、この細胞の分化因子の発現に対して抑制的であることが示唆された。その影響を分子レベルで解析する為に、ホメオボックス領域に特異的なprimerを設計し、3'-RACE法を用いて検出を試みたところ、HoxA5について、発現が抑制される傾向が示された。
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[Publications] T.Yoshimi,Y.Takahashi et al.: "Studies on lung epithelial cell differentiation using in vitro culture system"Cell Structure and Function. 24・6. 666 (1999)
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[Publications] N.Nakamura,T.Yoshimi et al.: "Analysis of Hox-related genes involved in the lung epithelial cell development."Cell Structure and Function. 24・6. 666 (1999)
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[Publications] S.Shimada,T.Yoshimi et al.: "CCSP promoter based GFP expression in the course of lung epithelial cell differentiation."Cell Structure and Function. 25・6(in press). (2000)
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[Publications] T.Yoshimi,Y.Takahashi et al.: "Changes in lung-specific molecular expression during differentiation of hamster embryonic M3E3/C3 cell line."Biochemistry and Cell Biology. 78・6. 659-666 (2000)
