1999 Fiscal Year Annual Research Report
自己増殖能を有する多様性分子集団の構築とその機能探索
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11780418
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
江原 靖人 神戸大学, 発達科学部, 助教授 (40251657)
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| Keywords | DNA / ポリメラーゼ / 非天然 / ライブラリー / 進化分子工学 |
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| Research Abstract |
本研究の目的は有機化学と遺伝子工学を巧みに組み合わせることにより、分子の多様性と自己増殖能の両者を兼ね備えた、今までにはない新しい分子集団を構築し、その機能性を探索することである。平成11年度はDNAポリメラーゼの本来気質であるdCTP(デオキシシチジン3リン酸),dTTP(デオキシチミン3リン酸)の塩基部分の種々の糖鎖、アミノ酸、糖鎖を化学的に修飾した化合物を合成した。Heck反応を用いて、dCTP,dTTPの5'位に置換基を導入した。
これらの合成した新しい基質が、DNAポリメラーゼによってDNA鎖内に取り込まれることを確認した。両端にPCR増幅(耐熱性のDNAポリメラーゼ、dATP,dCTP,dGTP,dTTP,プライマーというものを加えて反応することにより、1分子のDNAを何百万倍にも増幅させる事ができる)のための20mer程度のプライマーを有する全長90mer程度の化学合成DNAを用意した。この化学合成DNAを鋳型とし、プライマー、化学合成した新しい基質、DNAポリメラーゼを加えて、DNAの伸長反応を行った結果、目的通り、合成した新しい基質がDNA内に取り込まれていることをゲル電気泳動解析より、確認した。DNAポリメラーゼもその由来により基質特異性が異なる。本研究で合成した新規な基質がどのポリメラーゼにもっとも取り込まれやすいか、数種類の由来の酵素を用いてスクリーニングを行った。
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