2000 Fiscal Year Annual Research Report
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11780434
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
朴 三用 理化学研究所, 研究技術開発室, 研究員 (20291932)
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| Keywords | NO還元酵素 / チトクロムP450 / X線結晶構造解析 |
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| Research Abstract |
チトクロムP450norは、P450のスーパーファミリーにも関わらず、従来の機能である酸素一分子添加酵素として機能せず、一酸化窒素(NO)還元する機能を持っている(2NO+NADH+H^+→N_2O+H_2O+NAD^+)。前年度には、NO還元メカニズムを解明するため、機能に重要なアミノ酸である286SerをValとThrに置換した変異型P450norを調製して、活性測定及びX線の結晶構造解析を行って、NO還元メカニズムに関わる水素イオンのネットワックを特定することが出来た。今年は、それと共に、P450のI-helixに共通に保存されている243Thrに着目し、それの変異型を調整し、活性測定及びX線の結晶構造解析を行った。243Thrの変異型には、Asn,Ala,Valの3種類を調整し、NO還元活性測定を行った結果それぞれ、2%,3%,0%を示しており、NO還元に直接的に関わっていると考えられる。これらの変異型を高分解(ぞれぞれ1.4A分解能)のでX線構造解析を行った結果、NO分子からI-helixでの水素イオンのネットワックが切断せれており、NO還元に関わる電子供与体であるNADHの結合部位であると思われるところからのネットワックである。以上の結果から、NO還元メカニズムはに関わる電子は、I-helixの243Thrから、水素イオンの供給は286Serからくると推測でき、このネットワックより、NO分子を還元していると特定することが出来た。
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Research Products
(3 results)
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[Publications] Sam-Yong Park et al.,: "Proton Delivery in NO Reduction by Fungal Nitric Oxide Reductase : Cryogenic-crystallography, Spectroscopy and Kinetics of Ferric-NO Complexes of Wild-Type and Mutant Enzymes"J.Biol.Chem.. 275. 4816-4826 (2000)
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[Publications] Sam-Yong Park et al.,: "Crystal Structures of Cytochrome P450nor and Its Mutants (Ser286→Val, Thr) in the Ferric Resting State at Cryogenic Temperature : A Comparative Analysis with Monooxygenase Cytochrome P450s"J.Inor.Biochem.. 81. 191-205 (2000)
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[Publications] Sam-Yong Park et al.,: "Mutation Effects of A Conserved Threonine (Thr243) of Cytochrome P450nor on Its Structure and Function"J.Inor.Biochem.. 82. 103-111 (2000)
