1999 Fiscal Year Annual Research Report
メダカ胚における視細胞特異的グアニル酸シクラーゼ遺伝子ファミリーの発現制御機構
Project/Area Number |
11780527
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Research Institution | Hokkaido University |
Principal Investigator |
日下部 岳広 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助手 (40280862)
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Keywords | メダカ / 視細胞 / 網膜 / 松果体 / グアニル酸シクラーゼ / 細胞分化 / 転写調節 / レポーター遺伝子 |
Research Abstract |
1.メダカ視細胞特異的グアニル酸シクラーゼ遺伝子の発現様式の解析:3つの視細胞特異的グアニル酸シクラーゼ遺伝子O1GC3、O1GC4、O1GC5遺伝子の胚における発現をin situハイブリダイゼーションにより詳細に調べた。O1GC4は網膜視細胞と松果体に加え、鼻の嗅細胞でも発現することが新たに判明した。またO1GC4の松果体での発現は、網膜での発現よりも2日以上早く始まることが明らかになった。 2.メダカ視細胞特異的グアニル酸シクラーゼ遺伝子の構造解析:O1GC3とO1GC4の上流領域を含むゲノムDNAクローンの塩基配列を決定した。両遺伝子の5'非翻訳領域には、それぞれイントロンが一つ存在していた。両遺伝子近傍の塩基配列について、既知の転写因子の結合配列を検索したところ、Otxファミリーのホメオドメインタンパク質やbHLH型転写因子の結合コンセンサス配列が見い出された。 3.メダカ視細胞特異的グアニル酸シクラーゼ遺伝子の転写調節領域の機能解析:O1GC3とO1GC4の遺伝子上流領域にレポーター遺伝子をつないだ融合遺伝子を作製し、メダカ卵に顕微注入して、レポーター遺伝子の発現を調べることにより上流領域の機能を解析した。上流領域を段階的に5'側から削ることにより、O1GC3については転写開始点の上流約0.4kb、O1GC4では転写開始点の上流約2.4kbの領域がそれぞれの遺伝子の感覚細胞特異的発現に十分であることが分かった。一方で、より上流の領域にも転写を活性化するシス調節配列が存在することも示唆された。O1GC4の上流を約1.2kbまで削ると、嗅細胞での発現はみられなかったが、網膜と松果体では発現した。以上の結果から、O1GC3とO1GC4の3種類の異なる感覚細胞(視細胞、松果体細胞、嗅細胞)における発現には、複数の転写因子の異なる組み合わせが重要であると推測された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Tsuyoshi Mantoku: "Sequence analysis of cDNA and genomic DNA, and mRNA expression of the medaka fish homolog of the mammalian guanylyl cyclase C"Journal of Biochemistry. 125・3. 476-486 (1999)
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[Publications] William R.Jeffery: "Evolution of the ascidian anural larva : evidence from embryos and molecules"Molecular Biology and Evolution. 16・5. 646-654 (1999)
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[Publications] Toshiro Mikami: "Tandem organization of medaka fish soluble guanylyl cyclase alpha 1 and beta 1 subunit genes"Journal of Biological Chemistry. 274・26. 18567-18573 (1999)
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[Publications] Rie Kusakabe: "In vivo analysis of two striated muscle actin promoters reveals combinations of multiple cis-regulatory modules required for skeletal and cardiac muscle-specific gene expression"International Journal of Developmental Biology. 43・6. 541-554 (1999)
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[Publications] Takehiro Kusakabe: "The guanylyl cyclase family in medaka fish Oryzias latipes"Zoological Science. 17・3(印刷中). (2000)