中枢神経系の発生・分化にかかわる新しいセリンプロテアーゼ群の機能解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11780565
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 三井 真一 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (20295661)
• Keywords: セリンプロテアーゼ / Motopsin / Hippostasin / 選択的スプライシング / 運動神経 / 海馬

Research Abstract

1)Motopsin発現細胞の同定(Molecular Brain Research誌)
Motopsinの発現が最大となる生後10日齢の脳についてMotopsinが大脳皮質II/III、V、および、IVb層、辺縁系、海馬CA1の一部、その他すべての運動神経核に発現していることをin situ hybridizationによって明らかにした。運動神経核以外の領域での発現は、生後10日齢でみられるものの、成体マウス脳では認められなかった。
2)組み換え蛋白質の作製と酵素学的解析
trypsinogenのシグナル配列の下流にヒスチジンヘキサマーとenterokinaseの切断サイトを連結したbaculovirus用のベクターを開発した。これにHippostasinのプロテアーゼドメインをつないだコンストラクトを作製し、baculovirus発現系で産生させたところ、培養上清中に組み換え蛋白質が分泌された。組み換えプロテアーゼはキレートカラムで容易に精製され、エンテロキナーゼで処理することにより活性化することができた。Hippostasinについては、Boc-Phe-Arg-MCAを良い基質とするkallikrein様の酵素活性をもつことが明らかになった(論文投稿中)。現在、産生効率を上昇させるべく、コンストラクトを改良中である。
さらに、Hippostasinには選択的スプライシングにより脳型と前立腺型の2種類のmRNAが存在することを明らかにした。
以上は、北米神経科学会、日本神経科学会、日本生化学会、分子生物学会等で発表した。

Research Products

• [Publications] Iijima,N.,Tanaka,M.,Mitsui,S.,Yamamura,Y.,Yamaguchi,N.,and Ibata,Y.: "Expression of a serine protease(motopsin PRSS20) mRNA in the mouse brain : in situ hybridization histochemical study"Molecular Brain Research. 66. 141-149 (1999)