1999 Fiscal Year Annual Research Report
卵胞の選択的死滅を決定する新規顆粒層細胞特異的アポトーシス受容体の探索とその制御
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11876064
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
眞鍋 昇 京都大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (80243070)
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| Keywords | 卵巣 / 卵胞 / 顆粒層細胞 / アポトーシス / 細胞死受容体 / ブタ / モノクロナール抗体 / プログラム細胞死 |
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| Research Abstract |
ブタ卵巣の健常卵胞の顆粒層細胞にのみ特異的に発現し、健常卵胞由来の初代培養顆粒層細胞にアポトーシスを誘導できるモノクロナール抗体(PFG-1)を作製できた。下記のよう研究を進め、この抗体が新規アポトーシス受容体を認識していることが分かった。
(1)PFG-1抗体アフィニティーカラムを作製し、アポトーシス受容体の調製・精製を進めるとともに、卵胞発育ステージ別にアポトーシス受容体の発現とその三次元局在を明らかとした。
(2)上記PFG-1抗体力ラムを用い、細胞質リボゾーム部で「アポトーシス受容体-リボゾーム-mRNA複合体」を形成しているmRNAを分離・精製し、これを鋳型として相補的DNAをin vitro合成し、これをプロ一ブとしてアポトーシス受容体蛋白mRNAの塩基配列の一分を決定した。
(3)新規アポトーシス受容体蛋白には糖鎖が結合しており、受容体の立体構造や細胞表層の配位を決定する重要な役割をもつことが分かった。すなわち、グリコペプチダーゼ、工ンド-β-ガラクトシダーゼ等の各種糖鎖配列を特異的に認識する酵素にて消化後、糖鎖構造を推定し、次いで核磁気共鳴イメージング装置を用いて糖蛋白由来糖鎖プロトン核磁気共鳴スペクトルを観測した。Vliegenthartらの糖蛋白由来糖鎖プロトン核磁気共鳴スペクトルデータベースを検索して糖鎖構造を構造生物学的に決定した結果、アポトーシス受容体に結合している糖鎖の末端にはシアル酸残基がalpha5-6結合していることが分かった。
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Selection of oocytes in mammalian ovaries"Tissue Culture Engineering. 25・1. 4-8 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Endocrine-disrupting contaminants in animal products"Obstetrics and Gynaecology. 66・1. 254-265 (1999)
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[Publications] Yuzuru IMAI et al.: "Interactions of apoptosis and extracellular matrices in granulosa cells of atretic follicles in porcine ovaries"Journal of Mammalian Ova Research. 16・1. 59-66 (1999)
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[Publications] Yoshihiro KIMURA et al.: "Up-regulation of the alpha2, 6-sialyltransferase messenger ribonucleic acid increases glycoconjugates containing alpha2, 6-linked sialic acid residues in granulosa cells during follicular atresia of porcine ovaries"Biology of Reproduction. 60・6. 1475-1482 (1999)
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[Publications] Kozue UCHIO et al.: "Abnormalities of extracellular matrices and transforming growth factor beta1 localization in the kidney of the hereditary nephrotic mice(ICGN strain)"Journal of Veterinary Medical Science. 61・5. 769-776 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Immunochemical characteristics of a novel cell death receptor and a decoy receptor on granulosa cells of porcine ovarian follicles"Cytotechnology. 14・6. 111-121 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "Regulatory mechanisms of granulosa cell apoptosis in ovarian follicle atresia : Role of granulosa cell apoptosis in porcine ovarian follicle atresia. In : Animal Cell Technology.Ikura K.et al.eds"Kluwer Academic Pub.Ltd.,Dordrecht,The Nederlands. 968 (1999)
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[Publications] Noboru MANABE et al.: "A novel in vivo NMRtechnique to assess halocarbon induced hepatic failure in mice. In : Hazard Assessment and Control of Environmental Contaminants.Matsui S.et al.eds."IWA Conference Com.Pub.,Oxford,United Kingdom. 634 (1999)
