cDNAアレイを用いた慢性関節リウマチ滑膜発現遺伝子プロファイルの解析

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11877080
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 土屋 尚之 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (60231437)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山口 晃弘 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (90261974)
• Keywords: 慢性関節リウマチ / 滑膜 / 遺伝子発現

Research Abstract

1.モデル系として、培養末梢血単球に種々のサイトカインを加えて分化し、その前後におけるmRNA発現を、cDNAアレイを用いて検出した。従来放射性同位元素標識のプローブが用いられていたが、今回の研究により蛍光標識プローブを用いる検出系を確立し得た。
2.慢性関節リウマチ(RA)13例、変形性関節症(OA)6例の膝関節滑膜よりRNAを調整した。これらを用いたdifferential display法により、RA滑膜において多くの遺伝子断片の優先的な発現が見出された。それらの断片の塩基配列を決定したところ、それらのうちにはfollistatin-related protein,meningioma expressed antigen,inhibitor of differentiationなどの遺伝子が含まれることが明らかになった。これらを標的遺伝子として、mRNAを定量するため、競合的合成内部標準DNAを用いた定量的RT-PCR系を確立した。定量の結果、これらの遺伝子の多くにおいて、実際に大部分のRA患者滑膜において、OA患者と比較してmRNA量が増加していることが確認された。
3.現在、滑膜より精製したpoly A+ RNAを用い、上述の蛍光標識プローブを用いたcDNAアレイによる解析を施行中である。今後、上述の定量的RT-PCRの結果との対応を確認した上で、全ての滑膜検体についてcDNAアレイを用いた解析を進める予定である。

Research Products

• [Publications] Matsushita M. et al.: "Allele typing of human TNFA 5'-flanking region using PCR-PHFA (preferential homoduplex formation assay)"Tissue Antigens. 54. 478-484 (1999)
• [Publications] Shibue T. et al.: "Tumor necrosis factor α 5'-flanking region, TNF receptor II and HLA-DRBI polymorphisms in the Japanese patients with rheumatoid arthritis"Arthritis and Rheumatism. (印刷中). (2000)
• [Publications] 土屋尚之、徳永勝士: "多因子 病:免疫 疾患"現代医療. 32. 259-264 (2000)