1999 Fiscal Year Annual Research Report
移植レシピエント肝からの未知の劇症肝炎ウイルス遺伝子のクローニング
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11877090
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
千葉 勉 京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (30188487)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
上本 伸二 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (40252449)
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| Keywords | 生体肝移植 / 劇症肝炎 / 肝炎ウイルス / HBV / HCV |
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| Research Abstract |
平成10年より平成11年の1年間に当院にて生体肝移植を施行した劇症肝炎症例中、発症時の血清中に既知のウイルスマーカー(IgM-HA,HBs抗原,HBc抗体,HBv DNA,HCV抗体,HCV RNA)が陰性であり、かつ既往歴から薬剤性、アルコール性肝障害が否定された2例(成人1例、小児1例)について以下の検討を行った。
肝炎発現時と移植術後の肝機能障害軽快時の2つの時期の血清より、核酸(DNA,RNA)を抽出した。また、手術時に採取された肝組織からも同様に核酸の抽出を行った。
次に、肝炎期と術後軽快期それぞれの血清より抽出されたRNAをtemplateとして3'-オリゴ(dT)アンカープライマーを用いて逆転写反応を行い、合成されたcDNAを回収した。
任意の塩基配列をもつプライマーセットを使用し、これら2種類の時期のcDNAをtemplateとしてランダムなPCRを施行した。
上記PCR産物を熱変性処理後、変性処理ポリアクリルアミドゲル電気泳動装置を用いて、術前、術後cDNA由来のPCRサンプルそれぞれを電気泳動し、コンピューター処理による増幅バンドのサブトラクションを施行(differential display)、肝炎期に特異的に発現量の高いバンドを約20本(小児例)特定した。
上記サブトラクション解析で得られたバンドを回収ののち、再度PCRを行い、候補となる核酸の単離精製を現在進めているところである。
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[Publications] K.Koike,T.Chiba,H.Marusawa et al: "Survey of hepatitis B virus co-infection in hepatitis C virus infected patients suffering from chronic hepatitis and hepatocellular carcinoma in Japan"Jan.J.Cancer Res.. 90. 1270-1272 (1999)
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[Publications] H.Marusawa,T.Chiba et al: "High prevalence of anti-hepatitis B virus serological markers in patients with hepatitis C virus related chronic liver disease in Japan"Gut. 45. 284-288 (1999)
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[Publications] I.Shoji,T.Chiba et al: "Internal processing of hepatitis C virus N53 protein"Virology. 254. 315-323 (1999)
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[Publications] H.marusawa,M.Hijikata,T.Chiba et al: "Hepatitis C virus core protein inhibits fas-and tumor necrosis factor alpha-mediated apotosis via NF-KB activation"J Virology. 73. 4713-4720 (1999)
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[Publications] K.Iwai,M.Tashima,T.Chiba et al: "Fulminant hepatitis B following bone marrow transplantation in an HBs Ag-negative, HBsAb-positive recipient ; reactivem of dormant virus during the immuno suppre period."Bone Marrow Tromsplantation. 25. 105-108 (2000)
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[Publications] H.Marusawa,S.Uemoto,T.Chiba et al: "Latent hepatitis B virus infection in healthy individuals with antibodies to hepatitis B core antigen"Hepatology. 31. 488-495 (2000)
