蝸牛explantを用いた蝸牛有毛細胞死の機序の解明とその予防に関する研究

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 11877291
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 山岨 達也 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (60251302)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 肥後 隆三郎 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (10301110) ; 石本 晋一 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40292932) ; 鈴木 光也 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (50302724)
• Keywords: 培養 / 内耳 / 再生 / 遺伝子治療 / 有毛細胞

Research Abstract

成熟モルモットを麻酔・消毒後、滅菌操作で断頭し、側頭骨を摘出、実態顕微鏡下に蝸牛と前庭に分け、CO2インキュベーターに入れて培養した。その後1日-7日間培養し、固定してsurface preparationおよび透過電顕にて観察した。蝸牛においては培養2-3日以内に有毛細胞は死滅し、支持細胞も変性した。ただし、1-2日目の透過電顕の所見ではscar formationが見られ、一部支持細胞表面に有毛のような構造が見られた。前庭では有毛細胞の変性は蝸牛より遅く7日間の培養でも正常に近く保たれた。蝸牛・前庭どちらにおいても神経線維の脱落が培養初期より認められた。はじめはfree radical scavenger等の投与により有毛細胞死の防御を予定していたが、すでに同様の実験での報告がなされたため、この実験系を用いて遺伝子導入が可能か検討した。LacZ遺伝子を組み込んだアデノウィルスベクターを投与し、その発現を見たところ、蝸牛ではmesothelial cell以外に血管条、ラセン神経節、Deiters cellやpillar cellなどの支持細胞、外有毛細胞にLacZ遺伝子の発現が見られた。前庭では有毛細胞および支持細胞にLacZ遺伝子の発現が見られた。今後は神経賦活因子や再生関連遺伝子を組み込んだベクターの投与を行なう予定である。