1999 Fiscal Year Annual Research Report

抗アセチル化リジン抗体による新たなる核内調節機構の研究

Research Project

Project/Area Number	11878130
Research Institution	University of Tsukuba
Principal Investigator	中島利博筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (90260752)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	深水昭吉筑波大学, 応用生物化学系, 教授 (60199172)
Keywords	アセチル基転移酵素活性 / 転写コアクチベーター / アセチル化リジン抗体 / 動脈硬化症 / 血管平滑筋細胞 / トロンビン / MAPキナーゼ / CREB binding protein
Research Abstract	CREB binding protein(CBP)を初めとする転写コアクチベーターにヒストン、p53をはじめとする核内因子のリジン残基のε位へのアセチル基転移酵素活性が存在することが発見された。本酵素活性が転写のみならず、細胞分化・増殖・アポトーシスなど多くの生命現象に関与すると考えられている。本研究ではε位がアセチル化されたリジンを特異的抗体を作成し、核内アセチル化のシグナル伝達経路を解明することを目指している。本年度は上記1),2)に関して以下の解析を重点的に行った。 1)アセチル化リジン抗体(α-AK)の作成。家兎にアジュバンド化したε位がアセチル化されたリジンを抗原として6回定法に従い免疫した。得られた抗血清よりIgG画分を得た。さらに、ε位がアセチル化されたリジンを抗原カラムとして特異的アセチル化リジン抗体(α-AK)を精製した。は試験管内でアセチル化したヒストンを検出した。免疫染色により細胞核をのみ認識した。また、これらの所見はε-acetylated lysineの添加により特異的に阻害された。 2)α-AKの動脈硬化症への応用。動脈硬化巣の中膜平滑筋細胞の核が強くα-AKに反応した。トロンビンなどの増殖因子の添加により培養血管平滑筋細胞の核内アセチル化の亢進を生じさせることが可能であった。さらに、MAPkinase阻害剤、In Gel HAT(histone acetyl transferase)法を用いることにより、MAPkinase、およびCBPがトロンビンによるアセチル化亢進シグナルの下流に存在することが見いだされた。本研究により、トロンビンシグナル伝達が核内因子アセチル化へと至る全く新しいシグナル伝達経路の存在が示された。

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Nakajima,T: "Thrombin receptor mediated signals inkuce expressions of interieukin 6 and granulocyte colony stimulating factor via NF-κB activation in synovial fibroblasts."Annala of Rheumatic Diseases. 58. 55-60 (1999)
[Publications] Nakajima,T: "Inhibition of Thrombin-induoed Neural Cell Death by Recombinant Thrombomodulin and E5510,a Synthetic Thrombin Receptor Signaling Inhibitor"Thrombosis and Haemostasis. 82. 1071-1077 (1999)
[Publications] Nakajima,T: "Molecular characterization ob mesderm-restricted basic helix-loop-helix protein, POD-1/capsulin"Int.J.Md.Med.. 5. 27-31 (1999)
[Publications] Nakajima,T: "CRM1 mediates nuclear export of parvovirus minute virus of mice nonstructural protein,NS2"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 264. 144-150 (1999)
[Publications] Nakajima,T: "Overexpression of Core 2N-acetylglycosaminyltransferase Enhanced Cytokine Actions and Induced Hypertrophic Myocardium in Transgenic Mice"FASEB.J. 13. 2329-2337 (1999)
[Publications] Nakajima,T: "Hypernuclear acetylation in Atherosclerotic lesions and activated vascular smooth muscle cell"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 417-424 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

抗アセチル化リジン抗体による新たなる核内調節機構の研究

Principal Investigator

中島 利博 筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (90260752)

Research Products

[Publications] Nakajima,T: "Thrombin receptor mediated signals inkuce expressions of interieukin 6 and granulocyte colony stimulating factor via NF-κB activation in synovial fibroblasts."Annala of Rheumatic Diseases. 58. 55-60 (1999)

[Publications] Nakajima,T: "Inhibition of Thrombin-induoed Neural Cell Death by Recombinant Thrombomodulin and E5510,a Synthetic Thrombin Receptor Signaling Inhibitor"Thrombosis and Haemostasis. 82. 1071-1077 (1999)

[Publications] Nakajima,T: "Molecular characterization ob mesderm-restricted basic helix-loop-helix protein, POD-1/capsulin"Int.J.Md.Med.. 5. 27-31 (1999)

[Publications] Nakajima,T: "CRM1 mediates nuclear export of parvovirus minute virus of mice nonstructural protein,NS2"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 264. 144-150 (1999)

[Publications] Nakajima,T: "Overexpression of Core 2N-acetylglycosaminyltransferase Enhanced Cytokine Actions and Induced Hypertrophic Myocardium in Transgenic Mice"FASEB.J. 13. 2329-2337 (1999)

[Publications] Nakajima,T: "Hypernuclear acetylation in Atherosclerotic lesions and activated vascular smooth muscle cell"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 417-424 (1999)

中島利博筑波大学, 応用生物化学系, 講師 (90260752)