2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12024231
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| Research Institution | The Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
権藤 洋一 理化学研究所, 個体遺伝情報研究チーム, チームリーダー(研究職) (40225678)
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| Keywords | ヒトゲノム / タンデム反復配列 / サテライトDNA / ゲノム;不安定性 / 突然変異 / ゲノム機能 / ゲノム構造 / 脱ユビキチン化酵素 |
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| Research Abstract |
世代間10%という超可変性を示すヒト4p15領域に存在するRS447メガサテライトDNAは単位長4746bpのタンデム反復配列構造をもつ。単位長内には1590bpからなるORF様配列があり脱ユビキチン化酵素と高い相同性を示す。RS447相同配列はサル、ウシ、ウサギ、イヌ、ブタ、チャイニーズハムスター、ラットにも存在し、イヌ、マウス以外ではタンデム反復構造も示唆された。チャイニーズハムスターやラットよりも、マウスDUB-1、DUB-2の方が、ヒトRS447配列と高い相同性を示したが、マウスにおいては顕著なタンデム反復構造はない。本年度は、ヒトRS447反復配列の生物学的機能、とくにその中のORFにコードされている脱ユビキチン化酵素様の配列について検討した(Saitoh et al.,Genomics)。RNA blotting解析を行った結果、心臓、脳、肝、骨格筋に約2.4kbの転写産物が認めらた。想定される開始コドンの-89のGが転写開始塩基とわかった。また+2367と+2388が3′端と推定されpolyA付加サイトも+2321、+2362にそれぞれ存在している。転写長は2.47kbとなり、RNA blottingの結果と一致した。プロモーター活性解析の結果、-179から-143に必須な配列を同定した。この領域には逆向きのCAATボックスがあり、実際にCATCに置換すると転写活性が失われた。ちなみにTATAボックスは確認できない。ORFによってコードされる530残基ペプチドには、脱ユビキチン化酵素共通のCysドメイン、Hisドメイン領域がよく保存性されている。ヒト遺伝子命名法ガイドラインに沿ってこのペプチドをUSP17と名付けた。E.coliで発現させたUSP17は、実際に、T7タッグをつけたユビキチン化GFPを脱ユビキチン化した。しかし、CysドメインのCys-89をSerに置換したUSP17(S89)ではこの脱ユビキチン化は起こらなかった。以上より、RS447ORFにコードされるUSPは脱ユビキチン活性を持つことが証明された。
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Research Products
(7 results)
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[Publications] N.Matsuyama,S.Hadano,K.Onoe,H.Osuga,J.Showguchi-Miyata,Y.Gondo,J.E,Ikeda: "Identification and characterization of the miniature pig Hungtinton's disease gene homolog : evidence for conservation and polymorphism in the CAG triolet repeat"Genomics.. 69(1). 72-85 (2000)
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[Publications] Y.Saitoh,N.Miyamoto,T.Okada,Y.Gondo,J.Showguchi-Miyata S.Hadano,J.-E,Ikeda: "The RS447 human megasatellite tandem repetitive encodes a novel deubiquitinating enzyme with a functional promoter."Genomics.. 67(3). 291-300 (2000)
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[Publications] K.Ise,K.Nakamura,K.Nakao,S.Shimizu,H.Harada,T.Ichise,J.Miroshi,Y.Gondo,T.Ishikawa,Aiba: "Targeted deletion of the H-ras gene decreases tumor formation in mouse skin carcinogenesis."Oncogene.. 19(26). 2951-2956 (2000)
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[Publications] H.Murai,S.Takeuchi,Y.Nakatsu,M.Ichikawa,M.Yoshino,Y.Gondo,M.Katsuki,K.Tanaka: "Studies of in vivo mutations in rpSL transgene in UVB-irratiated epidermis of XPA-deficient mice."Mutat Res.. 450(1-2). 181-192 (2000)
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[Publications] Y.Shioyama,Y.Gondo,K.Nakao,M.Katsuki: "Different mutation frequencies and spectra among organs by N-methyl-N-nitrosourea in rpSL (strA) transgenic mice."Jpn J Cancer Res.. 91(5). 482-491 (2000)
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[Publications] S.Nakamura,H.Ikehata,J.Komura,Y.Hosoi,H.Inoue,Y.Gondo,K.Yamamoto,Y.Ichimasa,T.Ono: "Radiation-induced mutations in the spleen and brain of lacZ transgenic mice."Int J Radiat Biol.. 76(3). 431-440 (2000)
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[Publications] S.Sunahara,K.Nakamura,K.Nakao,Y.Gondo,Y.Nagata,M.Katsuki: "The oocyte-specific methylated region of the U2afbp-rslU2afl-rsl gene is dispensable for its imprinted methylation."Biochem Biophys Res Commun.. 268(2). 590-595 (2000)
