MutSヘテロダイマーによるミスマッチ認識機構の解析

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12143206
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 池島 三与子 日本医科大学, 医学部, 講師 (30246938)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 島田 隆 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (20125074)
• Keywords: ミスマッチ修復 / DNA修復蛋白質 / 遺伝子治療 / ゲノム不安定性 / 発癌

Research Abstract

ミスマッチを持つオリゴヌクレオチドを用いた遺伝子修復においてMutSヘテロダイマーによるミスマッチ認識機構を解析する。また遺伝子修復におけるミスマッチ修復系および他の修復系の関与を明らかにする。ミスマッチ修復系の認識機構を明らかにするだけでなく遺伝子を改変する技術としての開発も目標とする。
1)LacZalpha遺伝子を標的とした無細胞遺伝子修復系の確立とミスマッチ修復の関与:M13mp2ファージRFをテンプレートとし、ミスマッチを持つオリゴヌクレオチドに依存した無細胞での遺伝子修復系を確立した。テンプレートとオリゴヌクレオチドより構成されるD-loop中のミスマッチにhMutSalphaが結合することから、ミスマッチ修復系が遺伝子修復に関与することが予想された。しかしhMSH2欠損細胞抽出液を用いても遺伝子修復が見られることからミスマッチ修復系は関与しないことが示された。他の修復系の関与について現在検討している。
2)in vivoでの遺伝子修復系の確立:In vitroよりin vivoの方が遺伝子修復効率が高いという報告があるので、in vivoでの遺伝子修復系を確立した。標的遺伝子として不活性化したEGFP遺伝子、neomycin耐性遺伝子を用い、不活性化した遺伝子を安定に発現する細胞を樹立した。今後これらの細胞を用いて、ミスマッチを持つオリゴヌクレオチドの遺伝子修復活性およびその機構を検討する。

Research Products

• [Publications] Ikejima, M., Shimada, T.: "Molecular mechanism of oligonucleotide-mediated gene repair."Mol.Ther.. 5. S223 (2002)
• [Publications] Ikejima, M. et al.: "Interaction between chimeric RNA/DNA oligonucleotides and double-stranded DNA."Mol.Ther.. 3. S363 (2001)
• [Publications] 池島三与子, 島田隆: "ミスマッチ修復の分子機構"蛋白質・核酸・酵素. 46. 1124-1129 (2001)
• [Publications] Ichikawa, M. et al.: "Decreased UV sensitivity, mismatch repair activity and abnormal cell cycle checkpoints in skin cancer cell lines derived from UVB-irradiated XPA-deficient mice."Mutation Res.. 459. 285-298 (2000)
• [Publications] Orimo, H. et al.: "Association between single nucleotide polymorphisms in the hMSH3 gene and sporadic colon cancer with microsatellite instability."J.Hum.Genet.. 45. 228-230 (2000)
• [Publications] 池島三与子: "hMLH3、新規ミスマッチ修復蛋白質"医学のあゆみ. 194. 686-687 (2000)