2000 Fiscal Year Annual Research Report
酸化ストレスを伴う哺乳類細胞の生物学的系における抗酸化分子とチロシンキナーゼ
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12147202
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Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (B)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
丸 義朗 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (00251447)
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| Keywords | 金属蛋白 / HBP23 / ABL / 癌細胞 / 血管内皮細胞 / 2原子分子 |
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| Research Abstract |
3項目からなる。(1-抗酸化分子)ABLの各ドメインを断片としてtagを付けたうえで大腸菌で発現させ、純化精製したHBP23とのin vitro上での結合を検討した。ABLのSH3ドメインとHBP23との弱い結合を認めた。次に、ABLの活性化を伴う実験的生物学的系として、(イ)恒常的活性化型ABL発現細胞、(ロ)基底膜基質による細胞刺激、(ハ)H2O2刺激などを用い、HBP23の発現調節、リン酸化の有無、ABLとHBP23の細胞内結合を検討した。また、HBP23を過剰発現させることで、ABLの生化学的活性を検討した。いずれにおいても活性や発現の変化は明らかでなく、以前他のグループから出された主張を支持する実験結果は得られなかった。(2-酸化ストレスとDNA損傷)紫外線によるDNA修復障害を有するハムスター27-1細胞はXPBの発現でこれを復元できるが、恒常的活性化型ABLであるBCR-ABLの同時発現でこの復元効果が抑制される。同様な結果は、紫外線以外にDNA損傷性抗腫瘍剤cisplatinでも得られたが、H2O2では得られなかった。DNA損傷の誘導でp44がTFIIH,特にXPB沈降産物に結合してくることを観察した。BCR-ABLの発現の有無で純化精製したTFIIHのin vitro上DNA修復活性、転写活性を検討したところ、それぞれ5-10%低下、2倍上昇と変化を認めた。(3-血管と腫瘍)基底膜基質に浸潤して管腔を形成する内皮細胞の作製に成功した。この細胞はEuropean Journal of Cell Biologyの表紙に採用された。管腔形成能を有しない細胞に恒常的活性化型Flt-1を導入することで達成した。Flt-1は血管内皮細胞増殖因子のチロシンキナーゼ型受容体である。同様に導入した恒常的活性化型ABLであるBCR-ABLにはこの生物学的活性は認められなかった。恒常的活性化型Flt-1の作製法は評価され、Methods in Enzymologyの招待論文となった。現在、腫瘍細胞の低酸素反応性、2価重金属イオン反応性を検討中である
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[Publications] Maru,Y.: "Use of glutathione S-transferase (GST) as an artificial dimerization domain to activate oncogenes that require multimerization."Methods in Enzymology. 327. 429-440 (2000)
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[Publications] Maru,Y.,Hirosawa,H.,and Shibuya,M.: "An oncogenic form of the Flt-1 kinase has a tubulogenic potential in a sinusoidal endothelial cell line."Eur.J.Cell Biol.. 79. 130-143 (2000)
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[Publications] Maru,Y.: "Molecular biology of chronic myeloid leukemia."Int.J.Hematology. in press (印刷中). (2001)
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[Publications] Hiratsuka,S.,Maru,Y.,Okada,A.,Seiki,M.,Noda,T.,and Shibuya,M.: "Involvement of Flt-1 tyrosine kinase (vascular endothelial growth factor receptor-1) in pathological angiogenesis."Cancer Res.. in press (印刷中). (2001)
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[Publications] Kin,Y.,Shibuya,M.,and Maru,M.: "Inhibition of protein kinase C_-has negative effect on anchorage-independent growth of BCR-ABL-transformed Rat1 cells."Leukemia Res.. in press (印刷中). (2001)
